เอนไซม์ไรโบนิวคลีเอส (RNase) จัดอยู่ในกลุ่ม EC 3.1.27 เร่งการย่อยสลาย RNA มีบทบาทหน้าที่สำคัญ ในกระบวนการ transcription, translation และอื่นๆ นอกจากนี้ยังพบว่าเอนไซม์ในกลุ่มของ RNase A เช่น Onconase ซึ่งเป็น RNase ที่แยกได้จากกบ Northern Leopard frog (Rana pipiens) มีความเป็นพิษต่อ เซลล์มะเร็งหลายชนิด ยับยั้งการเพิ่มจำนวนของ HIV-1 และยังพบบทบาทหน้าที่อื่นๆอีกมากมาย ประเทศ ไทยมีความหลากหลายของสัตว์สะเทินน้ำสะเทินบกมาก มีโอกาสสูงที่จะพบโปรตีนที่มีกิจกรรมของเอนไซม์ ไรโบนิวคลีเอสชนิดใหม่ๆ ที่มีฤทธิ์ทางยาหรือมีประโยชน์ด้านต่างๆ จากการศึกษาเพื่อคัดกรองหาเอนไซม์ ไรโบนิวคลีเอสจากตัวอย่างสัตว์ทดลอง 5 ชนิด ได้แก่ กบนา (Rana tigerina) อึ่งอ่างบ้าน (Kaloula pulchra) กบจุก (Rana pileata) กบอ่องบ่อ (Rana nigrovittata) ปาดบ้าน (Polypedates mutus) พบ รูปแบบของเอนไซม์ไรโบนิวคลีเอสเด่นๆ เพียง 2 isoforms ที่มีขนาดน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 13 และ 14 kDa และพบว่าไรโบนิวคลีเอสจากไข่ของอึ่งอ่างเป็นตัวแทนที่ดีของสัตว์สะเทินนํ้าสะเทินบก การศึกษาครั้งนี้ จะใช้อึ่งยาง (Kaloula pulchra) และอึ่งเพ่า (Glyphoglossus molossus) โดยโปรตีนสกัดจากไข่จะถูกนำมา แยกบริสุทธิ์ด้วยเทคนิคโครมาโทกราฟฟีแบบแลกเปลี่ยนประจุบวก และไฮโดรโฟบิคคอลัมน์ พบว่าเอนไซม์ ไรโบนิวคลีเอส จากอึ่งยางมีค่าความจำเพาะต่อ RNA เท่ากับ 50.95 ยูนิตต่อมิลลิกรัมโปรตีน และมีค่าความ บริสุทธิ์เพิ่มขึ้นเป็น 2.07 เท่า สำหรับอึ่งเพ่า มีค่าความจำเพาะเท่ากับ 87.35 ยูนิตต่อมิลลิกรัมโปรตีน และมี ค่าความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้นเป็น 11.02 เท่า เอนไซม์ไรโบนิวคลีเอสที่แยกบริสุทธิ์ได้จากอึ่งยางและอึ่งเพ่า สามารถทำงานได้สูงที่สุดที่อุณหภูมิที่ 60 องศาเซลเซียส พีเอช 5.0 มีความเสถียรในช่วงพีเอช 4.0 ถึงพีเอช 6.0 และอุณหภูมิตั้งแต่ 30 ถึง 60 องศาเซลเซียส ผลของไอออนแมกนีเซียม ไอออนปรอท และไอออน สังกะสี มีผลยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ แต่ไอออนแคลเซียม มีผลทำให้เอนไซม์ทำงานได้เพิ่มสูงขึ้น เอนไซม์จากอึ่งเพ่าสามารถย่อยสับสเตรทชนิดที่เป็น โพลีซี และโพลียู แต่เอนไซม์จากอึ่งยางสามารถย่อย สับสเตรทได้ทั้ง 3 ชนิดทั้งโพลีซี และโพลียู และโพลีเอได้ เอนไซม์ที่แยกบริสุทธิ์ได้จากอึ่งยาง (0.5-16 นา โนกรัม/มิลลิลิตร) และอึ่งเพ่า (1.28-41 นาโนกรัม/มิลลิลิตร) ไม่สามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของ เซลล์มะเร็งทั้ง 3 ชนิดที่ใช้ทดสอบได้คือ HCT116, HT29 และ Hela เซลล์ เทียบกับ Vero เซลล์ การ วิเคราะห์โปรตีนขนาด 13 กิโลดาลตันของอึ่งยาง และ 14 กิโลดาลตันของอึ่งเพ่า ด้วยเทคนิค แอลซีเอ็มเอส (LC/MS) ไม่พบเปปไทด์ของโปรตีนขนาด 13 กิโลดาลตัน ที่เหมือนกับไรโบนิวคลีเอส ในฐานข้อมูล แต่พบ บางชิ้นของเปปไทด์จากโปรตีนขนาด14 กิโลดาลตันเหมือนกับไรโบนิวคลีเอสพี คอมโพเนนต์ ของ Borrelia turicatae 91E135, B. hermsii DAH B. duttonii Ly. of amphibians, so chances to found the new type of ribonucleases contained the effect of various drugs or useful are high. According to a study to screen for ribonuclease from 5 species of Amphibians; Rana tigerina, Kaloula pulchra, Rana pileata, Rana nigrovittata and Polypedates mutus. There are only 2 isoforms of ribonuclease with a molecular weight of approximately 13 and 14 kDa, which were found and indicated that Kaloula pulchra and Glyphoglossus molossus are a good representation of amphibians. This study use extracted oocytes of K. pulchra and G. molossus, which were purified by cation exchange column chromatography (CM-sepharose) and (C4) RP-HPLC. The RNase of G. molossus was purified about 11.02 fold and specific activity of 87.35 unit/mg. The RNase of K. pulchra was purified about 2.07 fold and specific activity of 50.95 unit/mg. These RNases had a similar optimum pH and temperature at 5.0 and 60 0C, respectively. These enzymes were stable at broad pH range from 4.0 to 6.0 and stable up to 60 0C after 1 h pre-incubation. They were strongly inhibited by Mg2+, Hg2+ and Zn2+ but were enhanced by Ca2+. The RNase activities of G. mollossus toward poly (C) were the highest while those toward poly (U) the second and those toward poly (A) the third which were barely detectable. Conversely, the RNase of K. pulchra could cleave poly (A) as well as poly (C) and poly (U). Similarly, however, RNase of G. mollossus (1.28-41ng/ml) and RNase of K. pulchra (0.5-16 ng/ml) had no antiproliferative activity on three cancer cell lines and non cancer cell lines. The peptide mass fingerprints of protein 13 kDa of K. pulchra and 14 kDa of G. molossus were determined by LC/MS and MASSCOT program. The results showed that 13 kDa of K. pulchra no identical peptide mass fingerprint compared to the protein database. However, some peptides fragment of 14 kDa of G. molossus showed identical the RNase P proteins component of Borrelia turicatae 91E135, B. hermsii DAH and B. duttonii Ly.