งานวิจัยนี้ได้ทำการค้นหายีนเปปไทด์ต้านจุลชีพชนิดใหม่ 3 ชนิด ได้แก่ ALFSp2, arasin-likeSp และ GRPSp จากปูทะเล Scylla paramamosain โดยพบว่ายีน ALFSp2, arasin-likeSp และ cDNAs GRPSp ประกอบด้วย ORF ขนาด 348, 198 และ 168 bp ที่ สามารถถอดรหัสให้กรดอะมิโน 115, 65 และ 55 กรดอะมิโนตามลำดับ ซึ่งมีน้ำหนักโมเลกุล ของ mature peptide 1079, 4373 และ 2995 ดาลตัน ตามลำดับ เมื่อตรวจสอบการแสดงออก ของยีน ALFSp2, arasin-likeSp และ GRPSp ในเนื้อเยื่อต่าง ๆ ของปูทะเล พบว่ายีนเหล่านี้มี การแสดงออกอย่างมากในเซลล์เม็ดเลือด จากการศึกษาฤทธิ์การยับยั้งการเจริญของเปปไทด์ สังเคราะห์ต่อเชื้อจุลินทรีย์พบว่า ALFSp2 นอกจากนี้ arasin-likeSp มีฤทธิ์ยับยั้งแบคทีเรียแก รมบวกและแกรมลบ (Aerococcus viridians และ Vibrio harveyi) โดย arasin-likeSp ยังมีฤทธิ์ ยับยั้งจุลินทรีย์ก่อโรคในอาหาร (V. parahaemolyticus และ Salmonella typhimurium) ได้ ในขณะที่เปปไทด์สังเคราะห์ GRPSp แสดงฤทธิ์ต้านแบคทีเรียแกรมบวก (A. viridans และ Micrococcus luteus) แต่ไม่ต้านแกรมลบ และผลที่ได้แสดงให้เห็นว่า ALFSp2, arasin-likeSp และ GRPSp เป็นเปปไทด์ต้านจุลชีพที่มีความสำคัญต่อระบบภูมิคุ้มกันของปูทะเล เมื่อศึกษาผล ของอุณหภูมิที่มีต่อฤทธิ์ต้านจุลชีพของ arasin-likeSp พบว่าเปปไทด์ต้านจุลชีพ arasin-likeSp มีเสถียรภาพทนความร้อนได้ที่ 100 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 15 นาทีเมื่อทดสอบคุณสมบัติการ ต้านจุลชีพของฟิล์มไคโตซานที่ผสมเปปไทด์ต้านจุลชีพ arasin-likeSp ต่อเชื้อก่อโรคในอาหาร V. parahaemolyticus ผลการศึกษาพบว่าฟิล์มสามารถยับยั้งการเจริญของจุลินทรีย์เป้าหมายได้ เฉพาะบริเวณที่ฟิล์มสัมผัส In this study, three novel antimicrobial peptides (ALFSp2, arasin-likeSp and GRPSp) were identified from the mud crab, Scylla paramamosain. The deduced open reading frames of the ALFSp2, arasin-likeSp and GRPSp cDNAs are 348, 198 and 168 bp, and encode for predicted peptides of 115, 65 and 55 amino acid residues, respectively. The calculated molecular mass of the mature peptides was 1079, 4373 and 2995 Da, respectively. In healthy crabs, ALFSp2, arasin-likeSp and GRPSp transcript levels were found to be high in the hemocytes. A synthetic ALFSp2 and arasin-likeSp peptide revealed the antimicrobial activity against both Gram-positive and Gram-negative bacteria including some crustacean pathogens (Aerococcus viridians and Vibrio harveyi. The arasin-likeSp also inhibited food-borne pathogen (V. parahaemolyticus and Salmonella typhimurium), whilst the synthetic GRPSp peptide exhibited antibacterial activity against some Gram-positive (A. viridans and Micrococcus luteus), but not Gram-negative bacteria. These results indicate that ALFSp2, arasinlikeSp and GRPSp are potentially novel AMPs involved in the immune responses of mud crab, S. paramamosain. The arasin-likeSp was selected to study the effect of temperature on antimicrobial activity. The result revealed that the arasin-likeSp is heat stable for up to 15 min at 100 oC. The antimicrobial property of chitosan film containing arasin-likeSp was tested against food-borne pathogen V. parahaemolyticus. The result revealed that the film was found to inhibit target microorganisms only on the contact surface.