ด้วยเทคนิคการแยกในสารละลาย Percoll จนได้เซลล์ เม็ดเลือดจานวน 3 ชนิด ได้แก่ hyaline (HC) granular (GC) และ semi-granular (SGC) เซลล์เม็ดเลือด ชนิดต่างๆเหล่าได้ถูกนามาสกัดและวิเคราะห์โปรตีนด้วยเทคนิคของโปรติโอมิกส์ พบว่าเซลล์เม็ดเลือดแต่ ละชนิดมีรูปแบบการแสดงออกของโปรตีนที่แตกต่างกันอย่างชัดเจน ซึ่งอาจหมายถึงการมีบทบาทหน้าที่ที่ แตกต่างกันด้วย เมื่อทา การระบุชนิดของโปรตีนเหล่านี้ พบว่าเซลล์เม็ดเลือดกลุ่มที่มีแกรนูล มีการ แสดงออกของโปรตีนหลายชนิดที่มีความเกี่ยวข้องกับขบวนการสร้างภูมิคุ้มกันของก้งุ อีกทัง้ เมื่อทา การ ทดลองฉีดเชื้อไวรัสหัวเหลือง เซลล์เม็ดเลือดกลุ่มนี้ยังเป็นเซลล์ที่เกิดการติดเชื้อไวรัสอีกด้วย นอกจาก การศึกษาเกี่ยวกับโปรตีนที่แสดงออกในเซลล์เม็ดเลือดเหล่านี้แล้ว โครงการนี้ยังได้ศึกษาถึงขบวนการเติม หมู่ฟอสเฟตของโปรตีนในเซลล์เม็ดเลือดกุ้งอีกด้วย โดยผลการวิเคราะห์พบว่ามีโปรตีนหลายชนิดที่มีเกิด การเติมหมู่ฟอสเฟตเพมิ่ มากขึ้นอย่างชัดเจนเมื่อเซลล์เม็ดเลือดเกิดการติดเชื้อไวรัส เช่น myosin regulartory light chain (MRLC) และ caspase จากการทดลองพบว่าการเติมหมู่ฟอสเฟตของโปรตีน MRLC มีความเกี่ยวข้องกับการเกิด phagocytosis ซึ่งหากยับยัง้ การเติมหมู่ฟอสเฟตของ MRLC ในเซลล์ เม็ดเลือดชนิด GC ที่มีการติดเชื้อไวรัสหัวเหลือง จะพบการลดลงของการเกิด phagocytosis และทา ให้ เกิดการตายของก้งุ เพมิ่ ขึ้นมาก ในส่วนของโปรตีน caspase นั้น พบว่าการเติมหมู่ฟอสเฟตที่เพมิ่ ขึ้นใน caspase ได้ชักนาไปสู่การเกิดการทา ลายเซลล์แบบ apoptosis ที่เพมิ่ มากขึ้นอีกด้วย ผลจากการทดลอง ต่างๆในโครงการนี้ ได้แสดงให้เห็นว่า การเปลี่ยนแปลงทัง้ ในด้านปริมาณการแสดงออกและการเติมหมู่ ฟอสเฟตของโปรตีนชนิดต่างๆในเซลล์เม็ดเลือดของก้งุ เป็นการตอบสนองต่อการติดเชื้อไวรัส ซึ่งการ เปลี่ยนแปลงเหล่านี้ ได้ส่งผลให้เกิดการทา หน้าที่ของโปรตีนต่างๆ ที่มีความสา คัญต่อการต่อต้านไวรัสและ รักษาสถาวะการอยู่รอดของเซลล์ โดยความรู้ความเข้าใจในเชิงลึกถึงปรากฏการณ์ที่เกิดขึ้นในระดับ โมเลกุลดังกล่าวนี้ อาจนาไปสู่การพัฒนาและประยุกต์ใช้เพื่อการรักษาหรือควบคุมการเกิดโรคไวรัสในก้งุ ได้ต่อไป We have utilized proteomic workflow and protein identification technology to investigate total protein expression in shrimp cells and tissues. In this project, we focused on the hemocytes that play a crucial role in shrimp defense mechanism. Circulating hemocytes separated from hemolymph of the black tiger shrimp (P. monodon) were classified into three types based on their granularity. They are hyaline (HC), granular (GC) and semi-granular cells (SGC). Each individual cell types were successfully isolated by Percoll gradient centrifugation and were investigated by proteomic analysis using 1D and 2D electrophoresis. These cell types demonstrated different pattern of protein expression suggesting distinctive functionality. LC/MS/MS protein identification of granular-containing cells uncovered many proteins involving in shrimp immune system. In yellow head virus (YHV) infected shrimp, we have demonstrated and confirmed that only GC and SGC can be infected by the virus. The study also investigated post translational phosphorylation of the proteins in GC during YHV infection. The results revealed several proteins with differential phosphorylation in post viral infection. Some of these proteins, myosin regulartory light chain (MRLC) and caspase were further examined for their functional roles in response to YHV infection. An increase of MRLC phophorylation was found to involve with defensive phagocytosis mechanism and rearrangement of actin polymerization. Inhibition of the MRLC phosphorylation in YHV infected cells showed a reduction of phagocytosis activity and increase in shrimp mortality. Moreover an increased phosphorylation of caspase was found to play roles in defensive apoptosis in the viral infected hemocytes. These results demonstrated that proteomic and phosphoproteomic changes in shrimp hemocytes are the responses of immunity against viral infection. The responsive changes in expression and phosphorylation of proteins such as MRLC and caspase could play the vital roles for shrimp survival. These research findings can provide a deep understanding of the molecular event that can be led to an effective control or treatment of the viral diseases in penaeid shrimps.