| ชื่อเรื่อง | : | การศึกษากลไกการปกป้องเซลตับในเชิงลึกและความเป็นพิษของสารสกัดจาก Sonneratia caseolaris และการนำมาเตรียมในรูป polyelectrolyte complex scaffold |
| นักวิจัย | : | ธวัชชัย แพชมัด |
| คำค้น | : | hepaoprotective mechanism , scaffold , Sonneratia caseolaris , toxicity , กลไกการปกป้องเซลตับ , ความเป็นพิษ , ลำพู , โครงสร้างความพรุนสูง |
| หน่วยงาน | : | สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2556 |
| อ้างอิง | : | http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=DBG5080014 , http://research.trf.or.th/node/7324 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดหยาบส่วนต่างๆ ของลำพูได้แก่ เกสร ที่หุ้มดอก เนื้อผล เมล็ด รากอากาศ และ ใบ จากการทดสอบการจับอนุมูลอิสระด้วยวิธี ferric reducing antioxidant power assay (FRAP) พบว่าการวิเคราะห์การถดถอยเชิงเส้นตรงของการทดสอบด้วย FRAP มีค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ 0.9883-0.9959 โดยสารสกัดที่หุ้มดอกแสดงฤทธิ์ปานกลาง ขณะที่มีค่า Gallic acid equivalent antioxidant capacity (GEAC) ของสารสกัดต่างๆ มีค่า 0.09-0.29 และความสัมพันธ์ระหว่างค่า GEAC และปริมาณรวม สารประกอบฟิโนลิคมีค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ 0.6374 แสดงว่าฤทธิ์การต้านออกซิเดชั่น 63.74% มาจาก สารประกอบฟิโนลิค สารสกัดของลำพูทำให้การอยู่รอดของเซลล์ลดลงเมื่อทดสอบโดยวิธี MTT assay โดยที่ เซลล์เพาะเลี้ยง normal human skin fibroblast (NHSF) เป็นเซลล์ที่ไวต่อการเกิดพิษในลักษณะนี้มากที่สุด เมื่อเทียบกับเซลล์อื่นที่ใช้ในการทดสอบนี้ ที่ได้รับสารสกัดจากลำพู อย่างไรก็ตามไม่พบว่าสารสกัดแสดง ความเป็นพิษต่อเซลล์ primary human fibroblast เมื่อทดสอบด้วยวิธี XTT โดยสารสกัดไม่ทำให้จำนวน เซลล์ลดลง อย่างไรก็ตามสารสกัดทำให้เซลล์มีการเปลี่ยนแปลงลักษณะภายนอกไป อย่างไรก็ตาม เมื่อ ทดสอบความเป็นพิษเฉียบพลันในหนูขาวและหนูถีบจักรที่ได้รับสารสกัดโดยการรับประทาน พบว่าสารสกัด จากส่วนของ ใบ เมล็ด และ กลีบดอก ที่เตรียมโดยการหมักกับ methanol ไม่ทำให้สัตว์ทดลองตายหรือมี อาการผิดปกติจึงถือว่าสารสกัดเหล่านี้ไม่มีพิษ ผลการศึกษา cytotoxicity ด้วยวิธี LDH leakage assay และ ผลการศึกษาฤทธิ์ในการปกป้องเซลล์ HepG2 ของสารสกัดจากเมล็ดลำพูต่อพาราเซตามอลโดยวิธี MTT assay พบว่ามีผลสอดคล้องไปในทิศทางเดียวกัน สารสกัดเมล็ดลำพู 30 μg/mL มีฤทธิ์ต้านการเกิดอนุมูล อิสระในสภาวะปกติและสามารถต้านการเกิดอนุมูลอิสระจากความเป็นพิษของพาราเซตามอล พบว่าสาร สกัดจากเมล็ดลำพูเพิ่ม glutathione และ catalase และลด superoxide dismutase และ CYP2E1 การลด การแสดงออกของ CYP2E1 น่าจะเป็นกลไกหนึ่งที่ทำให้ลดการเกิดการบาดเจ็บของเซลล์ HepG2 จาก สภาวะปกติและสภาวะที่ได้รับสารพิษได้ จึงสรุปได้ว่าสารสกัดเมล็ดลำพูมีฤทธิ์ปกป้องตับโดยคุณสมบัติต้าน สารอนุมูลอิสระ ระบบโครงสร้างความพรุนสูง 2 ระบบคือ chiotsan-lactate (CL) และชนิดที่เกิดแรงระหว่าง ประจุบวกของ chitosan และประจุลบของ stearic คือระบบ chitosan-aluminum monostearate (CLAlst) ถูกเตรียมขึ้นโดยอาศัยเทคนิคการทำแห้งแบบเยือกแข็งโดยใช้เครื่อง freeze dryer หลังจากนั้นนำมา ประเมินคุณสมบัติต่างๆ คือวิเคราะห์ปฏิกิริยาระหว่างหมู่ฟังก์ชั่นโดยใช้เทคนิค FT-IR spectroscopy ศึกษา คุณสมบัติเชิงผลึกโดยใช้เทคนิค x-ray powder diffraction (XRPD) ศึกษาลักษณะโครงสร้างภายใต้ iii scanning electron microscope (SEM) ศึกษาคุณสมบัติเชิงความร้อนโดยใช้ thermogravimetry (TG) และ differential scanning calorimetry (DSC) ประเมินความแข็งแรงของโครงสร้างโดยใช้ texture analyzer ศึกษาความสามารถในการดูดซับน้ำและการกร่อนใน phosphate buffer pH 7.4 และศึกษาการยึดเกาะของ เซลล์ HepG2 บนโครงสร้างความพรุนสูงทั้งที่ไม่บรรจุ และบรรจุสารสกัดจากเมล็ดลำพู ผลการศึกษาพบว่า IR spectra ของ CL และ CLAlst พบ peak ของ –C=O stretching ของ carboxylate salt form ที่บริเวณ 1580-1590 cm-1 ซึ่งบ่งบอกถึงพันธะ ionic ทั้งระหว่าง amino group ของ chitosan กับ side chain molecules เช่น lactate และ stearate หรือเป็นของ aluminum monostearate (Alst) ที่ยังไม่เกิดการแตกตัว และหลังผ่านการให้ความร้อนชื้นพบว่า IR spectra ที่บริเวณ 1580 -1700 cm-1 มีการเปลี่ยนแปลงไปอย่าง ชัดเจน โดยความร้อนชื้นอาจทำให้เกิดพันธะ amide ขึ้นในระบบ หลังขึ้นรูปเป็นโครงสร้างความพรุนสูง พบว่าความเป็นผลึกของระบบลดลงอย่างมากเมื่อเทียบกับสารเดี่ยว ทั้งนี้ระบบ CLAlst มีความเป็นผลึก มากกว่า CL ลักษณะโครงสร้างที่พบจากภาพ SEM พบว่ามีลักษณะเป็นรูพรุนที่ต่อเนื่องสม่ำเสมอ และ พบว่าระบบ CLAlst มีก้อนของ Alst เกาะกระจายอย่างสม่ำเสมออยู่บนผนังของโครงสร้าง ผลการศึกษา คุณสมบัติเชิงความร้อนโดย TG พบว่าหลังผ่านการขึ้นรูปเป็นโครงสร้างความพรุนสูงทำให้การสลายตัวโดย ความร้อนเร็วขึ้นกว่าสารเดี่ยวเนื่องมาจากความเป็นผลึกที่ลดลง และพบว่าช่วงอุณหภูมิในการสลายตัวของ ระบบ CLAlst สูงกว่าระบบ CL เล็กน้อย แสดงถึงความคงตัวทางความร้อนที่ดีกว่า จากการทดสอบด้วย DSC พบ endothermic peak เล็กๆ ที่แสดงถึง stearic acid ปรากฎขึ้นใน thermogram ของ CLAlst ที่ อุณหภูมิ 58°C และพบเด่นชัดขึ้นหลังผ่านการให้ความร้อนชื้น การวิเคราะห์ความแข็งแรงของโครงสร้างโดย texture analyzer พบว่าระยะเวลาในการผสมมีผลต่อความแข็งแรง และเนื่องมาจากความไม่ชอบน้ำที่สูง กว่าของระบบ CLAlst จึงมีค่าการดูดซับน้ำและการกร่อนในตัวกลางรวมถึงการยึดเกาะของเซลล์บน โครงสร้างน้อยกว่าระบบ CL The antioxidant activity of crude methanol extracts from stamen, sepal, meat of fruit, seed, pneumatophore and leaf was evaluated using free radical scavenging, ferric reducing antioxidant power assay (FRAP). The linear regression analysis of FRAP assay indicated good correlation coefficient (r2), 0.9883-0.9959. The sepal extract gave moderate antioxidant activitiy. Gallic acid equivalent antioxidant capacity (GEAC) values of these extracts were 0.09-0.29. The relationship between GEAC and total phenolic content could be confirmed by linear regression analysis which had a correlation coefficient (r2) = 0.6374. This r2 suggested that 63.74% of the reducing activity of extracts accessed from phenolic compounds. In vitro cytotoxicity testing of Sonneratia caseolaris extract was shown that these extracts decreased cell viability determining by MTT assay. Among those cells used in the study, cell line from normal human skin fibroblast (NHSF) was the most vulnerable cells for this toxic effect. The used extrat was not toxic to primary human fibroblast determining with XTT assay but there was the cell moephological change. However, acute toxicity testing in rats and mice revealed that methanolic extracts from leaves, petals and seeds of Sonneratia caseolaris were classified as nontoxic. The results for cytotoxicity with LDH leakage assay for Sonneratia caseolaris methanolic seed extract to acetaminophen was corresponding to the result of hepatoprotective activity with MTT assay. The 30 μg/mL extract inhibit the free radicle in normal condition and acetaminophen inducing condition. This extract could increase glutathione and catalase but decrease superoxide dismutase and CYP2E1. The decrease in CYP2E1 expression should be one of mechanisms to decrease the HepG2 cell injury. Therefore Sonneratia caseolaris methanolic seed extract exhibited the hepatoprotection by antioxidative activity. Two chitosan sponges systems including chiotsan-lactate (CL) and chitosan-aluminum monostearate (CLAlst) were fabricated by lyophillization technique using freeze dryer. Their physicochemical properties such as functional groups interaction, crystallinity and morphology were evaluated using FT-IR spectroscopy, x-ray powder diffraction (XRPD) and scanning electron microscope (SEM). Thermal behavior was investigated using thermogravimetry (TG) and differential scanning calorimetry (DSC). Structural strength was determined using texture analyzer. Water sorption and v erosion of the sponges were study in phosphate buffer pH 7.4. Cell attachment study was performed on the sponges with or without Sonneratia casseolaris seed methanolic extract. IR spectra of both CL and CLAlst exhibited –C=O stretching of carboxylate salt form at 1580-1590 cm- 1 indicating ionic bonding between amino group of chitosan and side chain molecules such as lactate and stearate or that of aluminum monostearate (Alst) residue. After moist heat treatment, IR spectra in the ranges of 1580 -1700 cm-1 was obviously changed. This indicated that moist heat treatment might cause amide bond creation in the system. Crystallinity of the system after fabrication as sponge was lower than that of the pure substances. However, CLAlst exhibited more crystal pattern than that of CL. Morphology of the sponges under SEM exhibited porous structure with homogeneous and interconnecting pore. In CLAlst, Alst clusters were uniformly distributed on the chitosan wall. Thermal behavior studied by TG indicated that thermal degradation of the sponges was found at lower temperature than that of the pure substances due to lowering of their crystallinity after fabrication. A degradation temperature range of the CLAlst was slightly higher than that of CL indicated the higher thermal stability of CLAlst. Small endothermic peak at 58°C that assigning to stearic acid was found in DSC thermogram of CLAlst and this peak was found sharpen after moist heat treatment. Texture analysis revealed that mixing time had influence on structural strength of the CLAlst sponge. Because of higher hydrophobicity of the CLAlst, water sorption and erosion together with cell attachment were lower than that of CL system. |
| บรรณานุกรม | : |
ธวัชชัย แพชมัด . (2556). การศึกษากลไกการปกป้องเซลตับในเชิงลึกและความเป็นพิษของสารสกัดจาก Sonneratia caseolaris และการนำมาเตรียมในรูป polyelectrolyte complex scaffold.
กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย. ธวัชชัย แพชมัด . 2556. "การศึกษากลไกการปกป้องเซลตับในเชิงลึกและความเป็นพิษของสารสกัดจาก Sonneratia caseolaris และการนำมาเตรียมในรูป polyelectrolyte complex scaffold".
กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย. ธวัชชัย แพชมัด . "การศึกษากลไกการปกป้องเซลตับในเชิงลึกและความเป็นพิษของสารสกัดจาก Sonneratia caseolaris และการนำมาเตรียมในรูป polyelectrolyte complex scaffold."
กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2556. Print. ธวัชชัย แพชมัด . การศึกษากลไกการปกป้องเซลตับในเชิงลึกและความเป็นพิษของสารสกัดจาก Sonneratia caseolaris และการนำมาเตรียมในรูป polyelectrolyte complex scaffold. กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2556.
|
