ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การยับยั้งการแสดงออกของยีนฟอติลินในกุ้งขาวโดยเทคนิค RNAi

หน่วยงาน สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การยับยั้งการแสดงออกของยีนฟอติลินในกุ้งขาวโดยเทคนิค RNAi
นักวิจัย : มลธิรา ทองอนันต์
คำค้น : apoptosis , Pm-fortilin , RNAi , Sf-fortilin , Sf9 , Shrimp
หน่วยงาน : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2553
อ้างอิง : http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=MRG5080392 , http://research.trf.or.th/node/6358
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

ยีนฟอติลิน (Fortilin) พบได้ทั่วไปทั้งในพืชและสัตว์ ทำหน้าที่เกี่ยวข้องกับการป้องกันการตายของเซลล์ภายใต้สภาวะกดดัน ฟอติลินของกุ้งหรือ Pm-fortilin ซึ่งมีกรดอะมิโนที่คล้ายกับของมนุษย์ประมาณ 64% โดยการศึกษาเบื้องต้นในเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมพบว่าสามารถป้องกันการตายของเซลล์ได้ เพื่อที่จะยืนยันผลดังกล่าวนักวิจัยได้ทดสอบหน้าที่ Pm-fortilin โดยการทดสอบการรอดชีวิตด้วยวิธี MTT assay ในเซลล์แมลง (Sf9) ซึ่งมีความใกล้เคียงกับกุ้งมากกว่า โดยการ overexpressed ยีนฟอติลินของกุ้งในเซลล์แมลง และทดสอบด้วยสารที่ชักนำการตาย ผลการทดลองพบว่า Pm-fortilin สามารถป้องกันการตายอย่างมีนัยสำคัญเมื่อทดสอบด้วยสาร etoposide, camptothecin และ cycloheximide นอกจากนี้นักวิจัยทำการทดลอง RNAi ของยีน Pm-fortilin ในเซลล์แมลง โดยผลการทดลองพบว่าเมื่อมีการยับยั้งการแสดงออกของ Pm-fortilin ที่มีการ overexpression และ Sf-fortilin ในเซลล์แมลงเองนั้น พบว่าทั้งสองการทดลองมีผลทำให้การแบ่งเซลล์น้อยลง จากผลดังกล่าวบ่งชี้ได้ว่า ฟอติลินมีผลต่อการป้องกันการตายของเซลล์และอาจจะมีผลต่อการควบคุมการแบ่งเซลล์ของเซลล์แมลงด้วย นอกจากนี้นักวิจัย ได้ทำการทดลอง RNAi ในกุ้งขาวเพื่อทดสอบหน้าที่ของ Pm-fortilin ในกุ้งแบบ reverse genetic approach เนื่องจาก Tonganunt และคณะ (2008) พบว่าโปรตีนลูกผสม Pm-fortilin มีผลทำให้กุ้งรอดตายมากขึ้นเมื่อกุ้งติดเชื้อไวรัส และพบว่าติดกุ้งไวรัสตัวแดงดวงขาวลดน้อยลง และยีนฟอติลินก็มีการแสดงออกเพิ่มมากขึ้นในเม็ดเลือดกุ้งเมื่อมีการติดเชื้อ โดยนักวิจัยได้เตรียม dsRNA ของยีน Pm-fortilin และฉีดเข้ากล้ามเนื้อกุ้ง พบว่าระดับการแสดงออกของยีน Pm-fortilin ในเม็ดเลือดกุ้งลดลงอย่างมีนัยสำคัญที่ 24 และ 48 ชั่วโมง เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม ผลดังกล่าวแสดงให้เห็นว่าระบบ RNAi ที่ใช้มีประสิทธิภาพดีและมีจำเพาะต่อยีนเป้าหมาย เมื่อทำการลดระดับการแสดงออกของยีน Pm-fortilin ระหว่างการติดเชื้อไวรัสในกุ้งพบว่าอัตราการตายของกุ้งเพิ่มสูงขึ้นในช่วงแรกของการติดเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาวเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม ดังนั้นจึงสามารถสรุปได้ว่า Pm-fortilin มีความสำคัญต่อการติดเชื้อไวรัสในกุ้งและอาจจะเกี่ยวข้องกับกระบวนการติดเชื้อไวรัสในกุ้ง Fortilin/translationally controlled tumor protein (TCTP), has been demonstrated to protect mammalian cells under stress from cell death. Fortilin/TCTP is an expressed protein found in wide range of organisms both the animal and plant kingdoms. Shrimp fortilin has a 64% identity in amino acid composition with human fortilin. In our previous work, shrimp fortilin (Pm-fortilin), when overexpressed in mammalian cells, protected them from cell death. To address the biological functions of shrimp fortilin, we established the cell survival assay with several kinds of toxic reagents in insect cell (Spodoptera frugiperda, Sf9) using MTT assay. The results showed that overexpressed of shrimp fortilin can protect cell from death induced by etoposide, camptothecin and cycloheximide. Furthermore, we performed RNA interference (RNAi) experiment to suppress fortilin gene expression in Sf9 cell. The data presented that both dsRNA of shrimp fortilin and endogenous Sf- fortilin have a potential to decrease cell proliferation. Taken together, our results suggest that fortilin able to protect cell from death and also appears to regulate cell proliferation and survival in Sf9 cell. In addition, we demonstrate that RNAi can be applied to study the function of the transgene expressed in insect cell line. In our previous work, recombinant fortilin was used to protect viral infected shrimp with 80-100% survival and detection of very low viral gene by PCR. Fortilin is abundantly expressed in hemocytes, and this is involved in survival of shrimp during infection. In this study, a reverse genetic approach was used to test the function of Pm-fortilin, we established RNA interference (RNAi) experiment to suppress Pm-fortilin gene expression in the pacific white shrimp. We performed by injection of double-strand RNA (dsRNA) of Pm-fortilin gene into the shrimp, resulted in a significant reduction of fortilin in hemocytes at 24 and 48 hours after injection when compared with the silencing of control gene. This study suggest that dsRNA of fortilin gene is capable of silencing sequence-specific gene in shrimp. The silencing of Pm-fortilin in shrimp during viral infection showed the increasing mortality of shrimp in early infection period. The results indicate that shrimp fortilin was important for survival of shrimp during viral infection and may be involving in viral infection mechanism.

บรรณานุกรม :
มลธิรา ทองอนันต์ . (2553). การยับยั้งการแสดงออกของยีนฟอติลินในกุ้งขาวโดยเทคนิค RNAi.
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
มลธิรา ทองอนันต์ . 2553. "การยับยั้งการแสดงออกของยีนฟอติลินในกุ้งขาวโดยเทคนิค RNAi".
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
มลธิรา ทองอนันต์ . "การยับยั้งการแสดงออกของยีนฟอติลินในกุ้งขาวโดยเทคนิค RNAi."
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2553. Print.
มลธิรา ทองอนันต์ . การยับยั้งการแสดงออกของยีนฟอติลินในกุ้งขาวโดยเทคนิค RNAi. กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2553.