ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การผลิตสารต้านจุลชีพจากแลคติกแอสิดแบคทีเรียในระบบทางเดินอาหาร

หน่วยงาน สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การผลิตสารต้านจุลชีพจากแลคติกแอสิดแบคทีเรียในระบบทางเดินอาหาร
นักวิจัย : ปิยะนุช เนียมทรัพย์(บุญคุ้มเกล้า)
คำค้น : Bacteriocin , gastrointestinal tract , Lactic acid bacteria , ระบบทางเดินอาหาร , แบคทีเรียกรดแลคติก , แบคเทอริโอซิน
หน่วยงาน : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2554
อ้างอิง : http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=MRG4780015 , http://research.trf.or.th/node/6206
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

การคัดแยกแบคทีเรียกรดแลคติกจากระบบทางเดินอาหารของคนและสัตว์ ที่สามารถผลิตแบคเทอริโอซินได้ โดยวิธี direct plating จำนวน 26,765 โคโลนี พบว่า มีโคโลนีที่เกิดวงใสต่อเชื้อทดสอบ จำนวน 66 ไอโซเลท เมื่อนำมาทดสอบฤทธิ์ของแบคเทอริโอซินในการยับยั้งต่อเชื้อทดสอบ โดยวิธี well diffusion assay พบว่า แบคทีเรียไอโซเลท CF50, CF51 และ CF52 มีฤทธิ์การยับยั้งต่อแบคทีเรียกรดแลคติกที่อยู่ในกลุ่มใกล้เคียง และแบคทีเรียก่อโรคบางชนิดในอาหารได้ แบคเทอริโอซินที่ผลิตจากแบคทีเรียทั้ง 3 ไอโซเลท สามารถทนความร้อนได้ที่อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียส นาน 20 นาที สามารถทนพีเอชได้ในช่วง 3.0-10.0 และกิจกรรมการยับยั้งของแบคเทอริโอซินถูกทำลายได้โดยเอนไซม์ที่ย่อยโปรตีน เช่น proteinase k และ protease จากการศึกษาฤทธิ์การยับยั้งต่อทดสอบ และการทนความร้อนของแบคเทอริโอซินที่ผลิตจากแบคทีเรียทั้ง 3 ไอโซเลท พบว่า แบคทีเรียไอโซเลท CF52 ให้ผลการทดสอบดีที่สุด เมื่อนำไปจำแนกชนิดของแบคทีเรียโดยใช้ชุดทดสอบ API 50 CH และหาลำดับเบสของ DNA ในส่วนของยีน 16S rRNA พบว่า เป็นแบคทีเรีย Lactobacillus salivarius CF52 จากการทดสอบหาองค์ประกอบของอาหารเลี้ยงเชื้อ และสภาวะที่เหมาะสมในการผลิตแบคเทอริโอซินของแบคทีเรีย Lb. salivarius CF52 พบว่า แบคทีเรียชนิดนี้สามารถผลิตแบคเทอริโอซินที่มีค่ากิจกรรมการยั้บยั้งสูงสุดเท่ากับ 5,120 AU/ml ในอาหาร MRS สูตรดัดแปลง ซึ่งประกอบด้วย maltose เข้มข้น 2.5 % (w/v), peptone เข้มข้น 0.5 % (w/v), beef extract เข้มข้น 1.0 % (w/v), K2HPO4 เข้มข้น 0.1-0.2 % (w/v), MgSO4.7H2O เข้มข้น 1.0 % (w/v), CH3COONa เข้มข้น 0.5 % (w/v), (NH4)2C6H6O7 เข้มข้น 0.2 % (w/v), MnSO4.H2O เข้มข้น 0.004 % (w/v) และ Tween 80 เข้มข้น 0.1 % (w/v) พีเอชเริ่มต้นของอาหารเลี้ยงเชื้อเท่ากับ 6.5 บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 16 ชั่วโมง ในสภาวะไร้ออกซิเจนและทำให้แบคเทอ-ริโอซินบริสุทธิ์บางส่วนโดยตกตะกอนด้วยเกลือแอมโมเนียมซัลเฟต และ gel filtration ทำให้ แบคเทอริโอซินมีกิจกรรมการยับยั้งจำเพาะสูงขึ้น 207 เท่า และมีน้ำหนักโมเลกุลโปรตีนประมาณ 3.5 kDa โดยวิธี 16.5 % Tris-Tricine-SDS-PAGE The isolation of 26,765 colonies of lactic acid bacteria (LAB) from human and animal gastrointestinal tracts to test for their bacteriocidin production through direct plating, resulted to only 66 isolates which were able to produce bacteriocin. Later when these isolates were tested for the antimicrobial spectrum of bacteriocin against indicator strains using the well diffusion assay, it was found that CF50, CF51 and CF52 isolates were able to inhibit not only closely related LAB but also some food-borne pathogens. Bacteriocin produced by these three strains was found to be heat resistant at 121oC for 20 minutes and pH range of 3.0-10.0 but bacteriocin was also found to be inactivated by enzymes, proteinase k and protease. Based on the study of the antimicrobial spectrum of the bacteriocin and heat resistance of these isolates, results indicated that bacterial isolate CF52 gave the best findings and later, when tested for classification of bacterial strain by API 50 CH and of DNA base sequencing in terms of 16S rRNA, this isolate was identified as Lactobacillus salivarius CF52. Further study on media composition and suitable culture conditions for bacteriocin production, results showed that this Lb. salivarius CF52 displayed optimum bacterial inhibition activity (5,120 AU/ml) when cultured with modified MRS medium containing maltose (2.5%), peptone (0.5%), beef extract (1.0%) K2HPO4 (0.1-0.2%), MgSO47H2O (1.0%), Na-acetate (0.5%), (NH4)2C6H6O7 (0.2%), MnSO4H2O (0.004%) and Tween 80 (0.1%), with an initial pH of 6.5 and incubated anaerobically at 37oC for 16 hours. In addition, when bacteriocin was partially purified using ammonium sulfate precipitation and gel filtration, results indicated a 270-fold increase of its specific activity and a molecular weight of about 3.5 kDa.

บรรณานุกรม :
ปิยะนุช เนียมทรัพย์(บุญคุ้มเกล้า) . (2554). การผลิตสารต้านจุลชีพจากแลคติกแอสิดแบคทีเรียในระบบทางเดินอาหาร.
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
ปิยะนุช เนียมทรัพย์(บุญคุ้มเกล้า) . 2554. "การผลิตสารต้านจุลชีพจากแลคติกแอสิดแบคทีเรียในระบบทางเดินอาหาร".
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
ปิยะนุช เนียมทรัพย์(บุญคุ้มเกล้า) . "การผลิตสารต้านจุลชีพจากแลคติกแอสิดแบคทีเรียในระบบทางเดินอาหาร."
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2554. Print.
ปิยะนุช เนียมทรัพย์(บุญคุ้มเกล้า) . การผลิตสารต้านจุลชีพจากแลคติกแอสิดแบคทีเรียในระบบทางเดินอาหาร. กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2554.