เอ็นไซม์ไกลคอซิเดสสามารถใช้ประโยชน์ในการศึกษาโครงสร้างเเละสังเคราะห์สารประกอบคาร์โบไฮเดรตงาน วิจัยนี้เป็นการตรวจสอบเอ็นไซม์ไกลคอซิเดสชนิดใหม่ที่น่าสนใจจากพืช เพื่อการเเยกเเละศึกษาคุณสมบัติของเอ็นไซม์ดังกล่าว จากการตรวจสอบกิจกรรมของเอ็นไซม์ไกลคอซิเดส 6 ชนิด คือเอ็นอะเซ็ททิลบีต้าดีกลูคอซามินิเดส อัลฟ่าดีเเมนนอซิเดส อัลฟ่าดีเเกเเลคโตซิเดส บีต้าดีเเกเเลคโตซิเดสอัลฟ่าดีกลูคอซิเดส เเละบีต้าดีกลูคอซิเดส จากตัวอย่างพืชไทย 59 ชนิด พบว่าเอ็นไซม์อัลฟ่าดีเเมนนอซิเดส(EC 3.2.1.24) ในเมล็ดถ่อนมีปริมาณมากที่สุด เมื่อเเยกบริสุทธิ์เอ็นไซม์ดังกล่าวจากเมล็ดถ่อนโดยวิธีตกตะกอนด้วยเเอมโมเนียมซัลเฟต โครมาโตกราฟฟี่เเบบเเลกเปลี่ยนไอออน โครมาโตกราฟฟี่เเบบเเรงไฮโดรโฟบิค โครมาโตกราฟฟี่เเบบเจลฟิลเตรชั่น เเละโครมาโตกราฟฟี่โดยใช้คอนคานาวาลินเอ ตามลำดับพบว่าเอ็นไซม์มีมวลโมเลกุลในธรรมชาติเป็น 320 kDa เมื่อวิเคราะห์ด้วยวิธีเจลฟิลเตรชั่น เเละมีจุดไอโซอิเล็คตริกเป็น 4.9 จากการวิเคราะห์โดยวิธี SDS-PAGE เเละอิเล็คโตรโฟรีซิสเเบบ 2 มิติ พบว่าเอ็นไซม์ประกอบด้วยหน่วยย่อยขนาด 110 kDa เเละ 120 kDa เมื่อเปรียบเทียบการใช้พาราไนโตรฟีนิลไกลคอซัยด์หลายชนิดเป็นสับสเตรทพบว่าพาราไนโตรฟีนิลดีเเมนนอซัยด์เป็นสับสเตรทที่ดีที่สุดของเอ็นไซม์โดยมีค่า Km เป็น 1.2 mM เเละค่าพีเอชที่ทำงานได้ดีที่สุดในช่วง 3.8-4.6 เอ็นไซม์คงความเสถียรได้ถึงอุณหภูมิ 60 0ซ. เเละเอ็นไซม์คงความเสถียรที่ pH 5.0-7.4 หลังจากการบ่มที่อุณหภูมิ 37 0ซ. เป็นเวลา 5 ชั่วโมง CaCl2,MgCl2, KCN, ZnCl2 เเละ EDTA ไม่มีผลต่อกิจกรรมของเอ็นไซม์ เอ็นไซม์สามารถเร่งปฏิกิริยาการย้ายหมู่เเมนโนสได้เมื่อใช้ดีเเมนโนสหรือพาราไนโตรฟีนิลดีเเมนนอซัยด์เป็นตัวให้หมู่เเมนโนสเเละเเอลกอฮอล์เป็นตัว รับหมู่เเมนโนส โดยพบว่าแอลกอฮอล์ปฐมภูมิสายสั้นให้ผลผลิตอัลคิลเเมนนอซัยด์ได้มากกว่าแอลกอฮอล์ปฐมภูมิ สายยาว ส่วนแอลกอฮอล์ทุติยภูมิให้ผลผลิตน้อยกว่า จากการวิเคราะห์โดยวิธีโครมาโตกราฟฟีสมรรถนะสูงพบว่า เอ็นไซม์สามารถเร่งปฏิกิริยาไฮโดรไลซิสเเบบย้อนกลับในการสังเคราะห์โอลิโกเเซคคาไรด์ได้คุณสมบัติของเอ็นไซม์อัลฟ่าดีเเมนนอซิเดสในเมล็ดถ่อนอาจสามารถนำไปประยุกต์ใช้ในการศึกษาบทบาทของคาร์โบไฮเดรต ในระบบของสิ่งมีชีวิต เเละการสังเคราะห์สารประกอบคาร์โบไฮเดรตที่เป็นประโยชน์ในอุตสาหกรรมอาหารเเละยา Glycosidases are enzymes which can be applicable to carbohydrate bioengineering by using either their specific hydrolytic activity or their reverse hydrolytic activity. This study aims to search for novel plant glycosidases and to isolate and characterize one such enzyme. Screening of six glycosidases namely: N-acetyl-β-D-glucosaminidase, α-D-mannosidase, α-D-galactosidase, β-D-galactosidase, α-D-glucosidase and β-D-glucosidase from 59 Thai plants showed that the highest enzyme activity was α-D-mannosidase in the seeds of Albizia procera Benth. The α-Dmannosidase (EC 3.2.1.24) was purified to apparent homogeneity by ammonium sulfate fractionation, DEAE-Cellulose, Butyl-Sepharose, Sephacryl S-300 HR, and Con A Sepharose chromatography. It had a native MW of 320 kDa when analyzed by gel filtration, and an isoelectric point of 4.9. Analysis using SDS-PAGE and 2-dimensional gel electrophoresis revealed that the enzyme contained subunits of 110 kDa and 120 kDa. Study with various p-NPglycoside-substrates indicated that the enzyme showed by far the highest activity for p-NP-α-Dmannoside with the Km value of 1.2 mM. The enzyme showed a pH optimum for p-NP-α-Dmannoside, ranging from pH 3.8-pH 4.6, and was stable up to 60 0C. It exhibited pH stability at 5.0-7.4 after incubation at 37 0C for 5 h. CaCl2, MgCl2, and KCN, ZnCl2 and EDTA did not have any significant effect on the enzyme activity with p-NP-α-D-mannoside. Transmannosylation activity was observed when the enzyme was incubated with D-mannose or p-NP-_-D-mannoside as mannosyl-donor and methanol, or ethanol, 1-propanol, 2-propanol, 1-butanol, 2-butanol, 1-pentanol, 2-methyl-1-propanol, 1-hexanol, and 1-heptanol, as mannosyl-acceptor. Short-chain primary alcohols gave better yields of alkyl mannosides than long-chain primary alcohols, and secondary alcohols gave poorer yields. Analysis using HPLC suggested that the enzyme displayed reverse hydrolysis activity for oligosaccharide synthesis. The enzyme properties may be applied to identifying the functional roles of carbohydrates in biological systems or to synthesizing oligosaccharide or glycosides used in food and pharmaceutical industry.