1. คัดกรองผู้ป่วยมะเร็งท่อน้ำดีชนิดในตับ (Intrahepatic cholangiocarcinoma) เนื่องจากพบมาในผู้ป่วยชาวไทย จากผลการตรวจทางพยาธิ โรงพยาบาลพระมงกุฎเกล้า และผู้ป่วยต้องได้รับการรักษาโดยการผ่าตัด 2. เก็บเนื้อเยื่อมะเร็งท่อน้ำดีของผู้ป่วยและข้อมูลทางพยาธิสรีระวิทยา จำนวน 5 ราย (ทำทีละราย ไม่จำเป็นต้องรอพร้อมกัน) นำเนื้อเยื่อใส่ในอาหารเลี้ยงเซลล์ Ham&rsquos F12 (GIBCO) ที่ใส่ยาปฏิชีวนะ (penicillin 100 U/ml Streptomycin 100 mg/ml gentamycin 100 mg/ml) ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ทันทีจากห้องผ่าตัด ทุกขั้นตอนต้องใช้เทคนิคปลอดเชื้อ 3. ล้างเนื้อเยื่อในบัฟเฟอร์ฟอสเฟต พีเอช 7.2 ตัดเนื้อเยื่อด้วยกรรไกร กรองในตะแกรงโลหะเพื่อให้ได้สารแขวนลอยของเซลล์เดี่ยวๆ 4. ล้างเซลล์ที่ได้ 2 ครั้ง ด้วยอาหารเลี้ยงเซลล์ Ham&rsquos F12 5. นำเซลล์ใส่ฟลาสค์สำหรับเลี้ยงเซลล์ ที่มีอาหารเลี้ยงเซลล์ Ham&rsquos F12 fetal bovine serum 10% epithelium growth factor 10 ng/ml penicillin 100 U/ml Streptomycin 100 mg/ml 6. บ่มเซลล์ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ในตู้บ่มคาร์บอนไดออกไซด์ 5% 7. สังเกตการเกาะของเซลล์ทีผิวฟลาสค์ ทุกวัน ประมาณ 3 วัน หลังจ