วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2556

เพปไทด์ต้านจุลชีพเป็นเพปไทด์ขนาดเล็กที่มีความสำคัญต่อระบบภูมิคุ้มกันของสิ่งมีชีวิตในธรรมชาติ มีคุณสมบัติในการยับยั้งการเจริญหรือฆ่าเชื้อจุลินทรีย์ได้หลายชนิด ทั้งแบคทีเรีย เชื้อรา และไวรัส จึงเป็นที่น่าสนใจที่จะนำมาใช้ในการยับยั้งการเจริญของจุลินทรีย์ในอาหาร จากงานวิจัยที่ผ่านมาได้มีการค้นพบเพปไทด์ต้านจุลชีพ bactenecin-likeSp (bacSp) ในเซลล์เม็ดเลือดของปูทะเล Scylla paramamosain ซึ่งพบว่ามีฤทธิ์ในการยับยั้งเชื้อจุลินทรีย์ได้หลายชนิด ในงานวิจัยนี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาการผลิต การทำให้บริสุทธิ์ สมบัติทางชีวภาพ และฤทธิ์การต้านจุลินทรีย์ของรีคอมบิแนนท์ bacSp โดยผลที่ได้พบว่าเวลาที่เหมาะสมที่มีการแสดงออกของรีคอมบิแนนท์ bacSp ภายหลังการเหนี่ยวนำให้มีการแสดงออกของรีคอมบิแนนท์โปรตีนด้วย 1 mM IPTG คือ 18 ชั่วโมง โดยอยู่ในรูปของโปรตีนที่ไม่ละลายน้ำ (inclusion body) เมื่อทำการละลายรีคอมบิแนนท์ bacSp ด้วยยูเรียความเข้มข้น 8 โมลาร์ จากนั้นผ่านการทำให้บริสุทธิ์ด้วย Ni2+-NTA โครมาโตกราฟี และนำมาวิเคราะห์ด้วย SDS-PAGE พบว่ารีคอมบิแนนท์ bacSp ที่ผ่านการแยกบริสุทธิ์ให้แถบโปรตีนเพียงแถบเดียว มีขนาดประมาณ 5,000 ดาลตัน เมื่อนำรีคอมบิแนนท์ bacSp ที่ได้ และเพปไทด์ต้านจุลชีพสังเคราะห์ bacSp มาตรวจสอบคุณสมบัติการยับยั้งเชื้อจุลินทรีย์ พบว่ารีคอมบิแนนท์ และเพปไทด์สังเคราะห์ของ bacSp มีฤทธิ์ในการยับยั้งการเจริญของ Vibrio parahaemolyticus ได้ และพบว่าเพปไทด์มีเสถียรภาพในการทนความร้อนได้ที่อุณหภูมิ 121 °C เป็นเวลา 15 นาที และที่ pH 6.5-9