ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การโคลน และการแสดงออกของโปรตีนเซลลูเลสจากหอยเชอรี่ (Pomacea canaliculata)

หน่วยงาน สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การโคลน และการแสดงออกของโปรตีนเซลลูเลสจากหอยเชอรี่ (Pomacea canaliculata)
นักวิจัย : จันทร์ประภา อิ่มจงใจรัก
คำค้น : cellulase gene , cloning , golden apple snail , Pomacea canaliculata , หอยเชอรี่ , เซลลูเลส , โคลน
หน่วยงาน : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2552
อ้างอิง : http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=MRG4980168 , http://research.trf.or.th/node/2263
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

ในงานวิจัยนี้ได้ค้นหาลำดับนิวคลีโอไทด์ที่สมบูรณ์ ศึกษาลักษณะสมบัติ วิเคราะห์การจัดเรียงตัวของยีนและศึกษาการแสดงออกของยีน glycosyl hydrolase family 10 ในหอยเชอรี่(Pomacea canaliculata) จากการวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์พบยีน 2 ไอโซฟอร์ม (GHF10-Pc1 และ GHF10-Pc3) มีขนาด 1300 bp และ 1277 bp ตามลำดับ โดยทั้ง 2 ไอโซฟอร์มมีopen reading frame (ORF) ที่สมบูรณ์มีขนาด 1188 และ 1191 bp ตามลำดับ ซึ่งสามารถถอดรหัสให้โปรตีนที่มีขนาด 395 และ 396 กรดอะมิโน เมื่อนำลำดับกรดอะมิโนของยีนมา เปรียบเทียบความเหมือนกับยีนที่มีรายงานไว้พบว่าลำดับของกรดอะมิโนของยีนที่ได้มีความคล้ายกับยีนเซลลูเลสในหอย Ampullaria crossean 98% และ 82% ตามลำดับ และมีความคล้ายกับเซลลูเลสในกลุ่ม glycosyl hydrolase family 10 (GHF10) จากการศึกษาการจัดเรียงตัวของยีนพบว่า GHF10-Pc1 และ GHF10-Pc3 มีขนาด 4937 และ 4512 bp ประกอบด้วย 9 exon และ 8 intron ตามลำดับ จากการตรวจสอบการแสดงออกของยีนในหอยเชอรี่ระยะต่าง ๆเช่นไข่หอย และลูกหอยอายุ 1 และ 10 วัน พบว่าไม่มีการแสดงออกของยีนทั้งสองในระยะไข่หอย และพบว่ามีการแสดงออกของ GHF10-Pc1 ในลูกหอยระยะ 1 และ 10 วัน ส่วนยีนGHF10-Pc3 พบมีการแสดงออกในระยะ 1 วัน จากการศึกษาการแสดงออกของยีนเซลลูเลสในE. coli โดยเหนี่ยวนำให้เกิดการแสดงออกของยีนด้วย IPTG และวิเคราะห์รีคอมบิแนนท์โปรตีนด้วย SDS-PAGE พบว่ามีการแสดงออกของรีคอมบิแนนท์โปรตีนอยู่ในส่วน inclusionbodies ซึ่งสามารถทำให้บริสุทธิ์ได้โดยใช้ Ni-NTA column chromatography เมื่อวิเคราะห์แถบโปรตีนด้วย SDS-PAGE พบว่ารีคอมบิแนนท์โปรตีนที่ได้มีขนาด 44 kDa ซึ่งเมื่อนำรีคอม บิแนนท์โปรตีนไปตรวจสอบคุณสมบัติของเอนไซม์พบว่ารีคอมบิแนนท์โปรตีนมีแอคติวิตี้ของเอนไซม์ endo-β-1,4-xylanase Two cellulase cDNAs (GHF10-Pc1 and GHF10-Pc3) belonging to glycoside hydrolase family 10 (GHF10) were successfully isolated and characterized from stomach tissue of golden apple snail (Pomacea canaliculata), a kind of herbivorous mollusca. Sequencing analysis revealed full-length cDNAs of 1300 and 1277 bp in length, respectively. The open reading frame (ORF) of cellulase cDNA was 1188 and 1191 bp, encoding 395 and 396 amino acid, respectively. Sequence alignment revealed that GHF10-Pc1 and GHF10-Pc3 shared high identity with glycosyl hydrolase family 10 (GHF10) and had an overall similarity of 98 and 82% to those of Ampullaria crossean cellulase EGX. A neighbour-joining tree showed a clear differentiation between each species and also indicated that GHF10-Pc1 and GHF10-Pc3 from P. canaliculata and A. crossean EGX are closely related phylogenetically. The genomic organization of cellulase GHF10-Pc1 and GHF10-Pc3 genes was also investigated. The GHF10-Pc1 and GHF10-Pc3 genes spanned over 4937 and 4512 bp, respectively. Both genes contained 9 exons interrupted by eight introns. The result verified the endogenous origin of the GHF10-Pc1 and GHF10-Pc3 genes. Analysis of RNA by RT-PCR from several ages of P. canaliculata revealed that neither gene was expressed in eggs. GHF10-Pc1 was also expressed in 1- and 10-day-old juvenile snails whereas GHF10-Pc3 was expressed only in 1-day-old juvenile snails. The result showed that two GHF10-Pc transcripts were developmentally expressed. The mature GHF10-Pc1 was cloned into the expression vector pET28b with an N-terminal hexa-histidine tag fused in-frame, and expressed in E. coli as inclusion body. The recombinant (r)GHF10-Pc1 was successfully purified by Ni-NTA chromatography. The purified rGHF10-Pc1 showed activity of endo-β-1,4-xylanase.

บรรณานุกรม :
จันทร์ประภา อิ่มจงใจรัก . (2552). การโคลน และการแสดงออกของโปรตีนเซลลูเลสจากหอยเชอรี่ (Pomacea canaliculata).
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
จันทร์ประภา อิ่มจงใจรัก . 2552. "การโคลน และการแสดงออกของโปรตีนเซลลูเลสจากหอยเชอรี่ (Pomacea canaliculata)".
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
จันทร์ประภา อิ่มจงใจรัก . "การโคลน และการแสดงออกของโปรตีนเซลลูเลสจากหอยเชอรี่ (Pomacea canaliculata)."
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2552. Print.
จันทร์ประภา อิ่มจงใจรัก . การโคลน และการแสดงออกของโปรตีนเซลลูเลสจากหอยเชอรี่ (Pomacea canaliculata). กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2552.