จากการศึกษาก่อนหน้านี้ด้วยการเปลี่ยนแปลงยีนเฉพาะที่ของโปรตีนสารพิษ Cry4B จากแบคทีเรีย ~iBacillus thuringiensis~i พบว่ากรดอะมิโนในเกลียวอัลฟาที่ 5 ของ โดเมนที่หนึ่ง น่าจะมีบทบาทสำคัญต่อเสถียรภาพและการม้วนพับของโครงสร้างโปรตีน ดังนั้นการวิจัยนี้จึงมีจุดมุ่งหมายเพื่อศึกษาผลของการปรับเปลี่ยนกรดอะมิโนในตำแหน่ง ดังกล่าว ที่มีต่อการม้วนพับและเสถียรภาพของโปรตีนภายใต้อิทธิพลของความร้อนและสารเคมี โปรตีนกลายพันธุ์ 4 ชนิด ถูกสร้างขึ้นโดยการเปลี่ยนแปลงยีนเฉพาะที่ด้วยเทคนิคปฏิกิริยา ลูกโซ่โพลีเมอเรส โดยได้เปลี่ยนกรดอะมิโนอนุรักษ์ aspartic acid ตำแหน่ง 191 บนเกลียวอัลฟาที่ 5 ซึ่งตั้งอยู่กลางโดเมนที่หนึ่ง ไปเป็น alanine (D191A), glutamic acid (D191E), lysine (D191K) และ asparagine (D191N) เมื่อยีนกลายพันธุ์ ได้แสดงออกในแบคทีเรีย ~iEscherichia coli~i JM109 พบว่า โปรตีนกลายพันธุ์ทั้งหมด ถูกสร้างขึ้นในรูปของ inclusion เช่นเดียวกับโปรตีนต้นแบบ แต่ความสามารถในการละลาย ในสารละลายคาร์บอเนต pH 10.0 ของโปรตีนกลายพันธุ์ D191A, D191K และ D191N มีการ สูญเสียไปอย่างชัดเจน ซึ่งแสดงให้เห็นว่าการม้วนพับของโครงสร้างของโปรตีนกลายพันธุ์ D191A, D191K และ D191N มีความแตกต่างไปจากลักษณะโครงสร้างของโปรตีนต้นแบบ และเมื่อ ทดสอบความสามารถในการฆ่าลูกน้ำยุงลายของโปรตีนกลายพันธุ์ทั้ง 3 ชนิดนี้ พบว่าได้ สูญเสียฤทธิ์ในการฆ่าลูกน้ำยุงไปด้วย อย่างไรก็ตามโปรตีนกลายพันธุ์ D191E ซึ่งมีการ เปลี่ยนแปลงกรดอะมิโนในตำแหน่ง 191 ในลักษณะของการแทนที่แบบอนุรักษ์ประจุ ยังคง รักษาความสามารถในการละลายและฤทธิ์ในการฆ่าลูกน้ำยุงไว้ได้เหมือนโปรตีนต้นแบบ เมื่อ โปรตีนกลายพันธุ์ D191A ถูกเปลี่ยนกลับไปเป็นโปรตีนต้นแบบ (A191D) พบว่าคุณสมบัติ ทางชีวเคมีได้กลับคืนมาด้วยเช่นกัน ชี้ให้เห็นว่าการเปลี่ยนแปลงที่สังเกตได้ทั้งหมด เป็นผลจากการเปลี่ยนแปลงเฉพาะที่ในตำแหน่งจำเพาะนี้เท่านั้น เมื่อศึกษาเสถียรภาพ ของโปรตีนกลายพันธุ์ (D191E) เปรียบเทียบกับโปรตีน Cry4B ต้นแบบ ภายใต้อิทธิพล ของอุณหภูมิและสารเคมี GuHCl โดยติดตามการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างด้วยเทคนิค circular dichroism พบว่า โปรตีนทั้งสองมีลักษณะโครงสร้างรวมเหมือนกัน และเมื่อได้ทำการ กำจัดสัญญาณรบกวนออกไปจาก circular dichroism spectra ด้วยทฤษฎี singular value decomposition แล้ว กราฟแสดงการเสียสภาพของโครงสร้างภายใต้อิทธิพลของอุณหภูมิ ได้รายงานจุดกึ่งกลางของการเสียสภาพที่ 68.3 (+,ฐ)C และ 66.9 (+,ฐ)C สำหรับโปรตีนต้นแบบและโปรตีนกลายพันธุ์ตามลำดับ ในขณะที่การเสียสภาพภายใต้อิทธิพล ของสารเคมี GuHCl มีจุดกึ่งกลางการเสียสภาพของโปรตีนต้นแบบ Cry4B และโปรตีนกลายพันธุ์ D191E อยู่ที่ 3.6 M และ 3.5 M GuHCl ตามลำดับ ผลการวิจัยนี้ ได้แสดงให้เห็นถึงบทบาท และความสำคัญของกรดอะมิโนอนุรักษ์ชนิด asparitc acid ที่ตำแหน่ง 191 ในการรักษา สภาพทางโครงสร้างโมเลกุลให้สามารถดำรงอยู่ได้