จากการศึกษาก่อนหน้านี้พบว่าเกลียวอัลฟาที่ 4 และ 5 ((+,a)4 และ (+,a)5) มีบทบาทที่สำคัญต่อฤทธิ์ฆ่าลูกน้ำยุงลาย (~iAedes aegypti~i) ของโปรตีนสารพิษ Cry4B จากแบคทีเรีย ~iBacillus thuringiensis~i งานวิจัยนี้ได้ศึกษาเพิ่มเติมโดยทำการ แทนที่กรดอะมิโนที่ตำแหน่ง Arg-143, Gln-149, Asn-151, Lys-156, Arg-158 หรือ Glu-159 ด้วยกรดอะมิโน alanine จากการทดสอบความเป็นพิษของโปรตีนกลายพันธุ์ดังกล่าว พบว่า การแทนที่ ณ ตำแหน่ง Arg-158 ด้วย alanine (R158A) นั้นทำให้โปรตีนสูญเสีย ความเป็นพิษต่อลูกน้ำยุงลาย อย่างไรก็ตาม โปรตีนกลายพันธุ์อีก 5 ชนิด ซึ่งเกิดจาก การแทนที่ ณ ตำแหน่งอื่นๆ (R143A, Q149A, N151A, K156A และ E159A) เมื่อศึกษาเพิ่มเติม พบว่าการแทนที่ Arg-158 ด้วย glutamine, lysine หรือ glutamate นั้นยังคงทำให้ โปรตีนสารพิษสูญเสียความเป็นพิษต่อลูกน้ำยุง นอกจากนี้พบว่าการแทนที่ Glu-159 ด้วย arginine แต่ไม่ใช่ด้วย glutamine นั้นทำให้โปรตีนกลายพันธุ์สูญเสียความเป็นพิษเช่นกัน เมื่อทำการศึกษาความสามารถในการนำไฟฟ้าผ่านผนังเนื้อเยื่อพบว่าโปรตีนสารพิษต้นแบบ สามารถทำให้เกิดรูอิออนที่มีการนำไฟฟ้าได้ถึง 563 pS ในขณะที่โปรตีนกลายพันธุ์ R158A, R158K, E159A และ E159R ให้ค่าการนำไฟฟ้าของรูอิออนในช่วง 25-320 pS นอกจากนี้จากการศึกษาเปปไดท์สังเคราะห์ที่มีลำดับกรดอะมิโนเหมือนกับลำดับใน (+,a)4, (+,a)5 และ (+,a)4 เชื่อมต่อกับ (+,a)5 ((+,a)4-loop-(+,a)5) พบว่าเปปไทด์ สังเคราะห์ (+,a)4 และ (+,a)4-loop-(+,a)5 มีความสามารถในการทำให้เกิดการแตก liposome มากกว่า (+,a)5 และยังพบว่าการแทนที่กรดอะมิโนในเปปไทด์ (+,a)4 เป็น R158A, R158K หรือ E159A นั้นไม่มีผลต่อการแตกของ liposome เมื่อได้ศึกษาโครงสร้าง ทุติยภูมิของเปปไทด์พบว่า (+,a)5 มีองค์ประกอบของโครงสร้างแบบเกลียวอัลฟามากกว่า (+,a)4 หรือ (+,a)4-loop-(+,a)5 นอกจากนี้ยังได้สร้างแบบจำลองของรูรั่วที่เกิดจาก ชิ้นส่วน (+,a)4-loop-(+,a)5 ของ Cry4B ในผนังเนื้อเยื่อโดยอาศัยเทคนิค Simulated Anneal/Molecular Dynamics (SA/MD) และทำการจำลองสภาวะเป็นเวลา 2 นาโนวินาที และเมื่อทำการจำลองสภาวะของรูรั่วที่เกิดจากโปรตีนกลายพันธุ์ R158A, R158K, E159A, E159R และ E(,158)R(,159) พบว่าโครงสร้างของรูรั่วมีการเปลี่ยนแปลงไปเพียงเล็กน้อย จากการศึกษาทั้งหมดสามารถเสนอแนะได้ว่ากรดอะมิโน arginine ที่ตำแหน่ง 158 และอาจ รวมถึง glutamate ที่ตำแหน่ง 159 ใน (+,a)4 มีบทบาทสำคัญในการออกฤทธิ์ฆ่าลูกน้ำ ยุงของโปรตีนสารพิษ Cry4B ซึ่งน่าจะเกี่ยวข้องกับกลไกการควบคุมอิออนไหลผ่านรูรั่ว บนผนังเนื้อเยื่อ