| ชื่อเรื่อง | : | การขยายยีนและหาลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีนอะซิเตตไคเนส ซึ่งเกี่ยวข้องในการใช้โพรเพนไดออล จาก Salmonella typhimurium |
| นักวิจัย | : | เจษฎา เด่นดวงบริพันธ์ |
| คำค้น | : | - |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2540 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=42177 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | พลาสมิด pDU1 ซึ่งมีชิ้นดีเอ็นเอขนาด 10 กิโลเบส จาก เชื้อ S. typhimurium สายพันธุ์ 23566 ซึ่งเป็นตัวตรวจจับ ดีเอ็นเอที่จำเพาะเชื้อ Salmonella สามารถทำให้เชื้อที่ถูก นำพลาสมิดนี้เข้าไป เจริญเป็นโคโลนีสีชมพูบนอาหารเลี้ยงเชื้อ Rambach agar พลาสมิด pDU6 และ pDU8 ซึ่งมีบางส่วนของ ดีเอ็นเอมาจากชิ้นดีเอ็นเอชิ้นนี้ สามารถทำให้เชื้อ E. coli, S. typhi และ S. paratyphi ซึ่งปรกติจะไม่มีสีบน Rambach agar สามารถสร้างโคโลนีสีแดงได้บนอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าว ผลการทดลองนี้ชี้ให้เห็นว่า มียีนที่อยู่บนพลาสมิด pDU6 และ pDU8 ที่มีความสามารถในการสร้างกรดได้มากเกินกว่าปรกติ ผลการวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์ของชิ้นดีเอ็นเอขนาด 5 กิโลเบสในพลาสมิด pDU6 แสดงให้เห็นว่า มียีนอย่างน้อย 2 ยีนอยู่ในชิ้นดีเอ็นเอนั้น ยีนหนึ่งเป็นยีน acetate kinase (ack) บนปลายด้าน EcoRI ของชิ้นดีเอ็นเอ ส่วนอีกปลายหนึ่ง ถูกพบว่า มีเพียงครึ่งช่วงยีนของยีนสำหรับสร้างไฮโดรเจนซัลไฟด์ (phsF) อยู่ยีน acetate kinase ของเชื้อ S. typhimurium นี้ ประกอบด้วยนิวคลีโอไทด์ 1206 เบส ซึ่งสามารถสังเคราะห์ เป็นโปรตีนขนาด 43.8 กิโลดาลตัน ในเอ็นไซม์นี้ลำดับกรด อะมิโน 2 ช่วงที่พบว่าเป็นตำแหน่งจำเพาะต่อการทำปฏิกริยา ของกลุ่มเอนไซม์ acetate kinase ลำดับนิวคลีโอไทด์ของ ยีนนี้ ได้ถูกส่งเข้าไปเก็บไว้ในฐานข้อมูล Genbank โดยเป็น ครั้งแรกที่ลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีน acetate kinase จาก เชื้อ Salmonella ได้ถูกรายงาน จากการทำ Southern blot hybridization ของโครโมโซมจาก Salmonella typhimurium, S. enteritidis, S. typhi, และ S. paratyphi กับยีน ack จาก S. typhimurium พบว่า จะได้ชิ้นดีเอ็นเอที่มีขนาด เดียวกัน เมื่อตัดด้วยเอนไซม์ตัดจำเพาะที่เหมือนกัน คือ เอนไซม์ NsiI, ClaI, และ ClaI/EcoRI ให้ผลการทดลอง ที่เหมือนกับที่กล่าวไว้ข้างต้น ขณะที่ไม่พบผลการ hybridize ระหว่างยีน ack ของ S. typhimurium กับดีเอ็นเอของเชื้อ อื่นๆ ภายใต้สภาวะ hybridize เดียวกัน จากการที่ไม่พบส่วน promoter ของยีนภายในชิ้นดีเอ็นเอของ pDU6 และ pDU8 ดังนั้น ส่วน upstream ขนาด 300 คู่เบสของยีน ack จึงได้ ถูกขยายยีนขึ้น และได้เชื่อมต่อเข้ากับพลาสมิด pDU8 และ วิเคราะห์ผล ผลการวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์นั้น ไม่พบ บริเวณที่น่าจะเป็น promoter ของยีนอยู่ แต่กลับพบช่วงยีน ที่ยังไม่ครบสมบูรณ์ของอีกยีนหนึ่ง ซึ่งอาจจะเป็นยีน phosphotransacetylase (pta) ซึ่งมักจะพบอยู่เป็น operon กับยีน ack ในเชื้อแบคทีเรียหลายชนิด ดังเช่น ack/pta operon ที่พบในเชื้อ C. acetobutylicum และ M. thermophila เพื่อ ที่จะทดสอบความเป็นไปได้ของการแสดงออกของยีน ack จึงได้ ทดลองศึกษาหาระดับเอนไซม์ acetate kinase จาก E. coli transformants ชนิดต่างๆ ทั้งที่มียีน ack อยู่ร่วมกับส่วน upstream region ของมัน หรือ ที่มีแต่ยีน ack เพียงอย่างเดียว ผลการทดลองพบว่า ระดับเอนไซม์ระหว่าง transformant ทั้ง 2 กลุ่มไม่มีความแตกต่างกันมากนัก ซึ่งอาจเป็นผลมาจากการขาด promoter ที่ทำงานได้ของยีน ack ในส่วน upstream region นั้น ดังนั้น ยีน ack จึงไม่น่าจะใช่ยีนที่ทำให้เกิดโคโลนีสีแดง ได้ทำการลดขนาดพลาสมิดด้วยการใช้เอนไซม์ SacI พบว่า transformant ที่มีพลาสมิดที่ถูกลดขนาดแล้ว โดยที่ส่วนใหญ่ ของยีน phsF หายไป ยังคงให้โคโลนีสีแดงบนอาหาร Rambach agar ขณะที่พบว่า transformant อื่นๆ ที่ขาดยีน phsF ทั้งหมดและส่วนของ downstream region ของยีนนี้ ได้กลาย เป็นโคโลนีไม่มีสีบน Rambach agar จึงน่าจะเป็นไปได้ว่ามียีน อื่นอยู่ในบริเวณระหว่างยีน phsF และยีน ack โดยยีนนี้น่าจะมี หน้าที่เกี่ยวข้องกับการสร้างกรด ซึ่งทำให้เปลี่ยนโคโลนีจาก ไม่มีสีเป็นโคโลนีสีแดง ดังนั้นจึงน่าที่จะทำการศึกษาขั้นต่อไป เพื่อระบุยีนที่มีส่วนต่อการสร้างโคโลนีสีแดง |
| บรรณานุกรม | : |
เจษฎา เด่นดวงบริพันธ์ . (2540). การขยายยีนและหาลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีนอะซิเตตไคเนส ซึ่งเกี่ยวข้องในการใช้โพรเพนไดออล จาก Salmonella typhimurium.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. เจษฎา เด่นดวงบริพันธ์ . 2540. "การขยายยีนและหาลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีนอะซิเตตไคเนส ซึ่งเกี่ยวข้องในการใช้โพรเพนไดออล จาก Salmonella typhimurium".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. เจษฎา เด่นดวงบริพันธ์ . "การขยายยีนและหาลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีนอะซิเตตไคเนส ซึ่งเกี่ยวข้องในการใช้โพรเพนไดออล จาก Salmonella typhimurium."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2540. Print. เจษฎา เด่นดวงบริพันธ์ . การขยายยีนและหาลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีนอะซิเตตไคเนส ซึ่งเกี่ยวข้องในการใช้โพรเพนไดออล จาก Salmonella typhimurium. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2540.
|
