| ชื่อเรื่อง | : | การตรวจหาสารพันธุกรรมของเชื้อไวรัสเอดส์, โดยเทคนิค พีซีอาร์ และยืนยันผลด้วยโอลิโกนิวคลีโอไทด์โพรบ ที่ติดฉลากด้วยไอโซโทบ ((32)p) |
| นักวิจัย | : | สุปภาต จิตจำนงชัย |
| คำค้น | : | - |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2539 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=41824 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | วิทยานิพนธ์นี้ได้พยายามพัฒนาเทคนิคพีซีอาร์ (PCR) เพื่อตรวจหาเชื้อไวรัสเอดส์ โดยการศึกษาและปรับปรุงขั้น ตอนที่สำคัญ 3 ขั้นตอน ได้แก่ การสกัด ดีเอ็นเอ, การเพิ่ม ขยายยีนของไวรัสและการตรวจวิเคราะห์ผลิตผลที่ได้จาก การเพิ่มขยาย การสกัดดีเอนเอ จากการศึกษาเปรียบเทียบการสกัด ดีเอ็นเอ โดยวิธีของ UCLA วิธี Salting out วิธี Crude lysale และวิธี Crude lysate salting out จากการศึกษา ครั้งนี้ วิธีที่ดีที่สุดทั้งในแง่ความสะดวกและประสิทธิภาพ ได้แก่ วิธี Crude lysate saltring out สำหรับการเพิ่มขยายยีนของไวรัสนั้น ทำการเพิ่ม ขยายด้วยเทคนิคพีซีอาร์ (Single PCR one step) เพื่อให้ ปฏิกริยาเกิดประสิทธิภาพสูงสุด ได้ทดลองใช้ความเข้มข้นของ สารต่าง ๆ ในปฏิกิริยา ได้แก่ MgCl(,2), dNTP และ primer ต่าง ๆ กัน และโปรแกรมของรอบปฏิกิริยาได้ทำการปรับให้ เหมาะสมกับ primer แต่ละคู่ ผลิตผลจากการทำพีซีอาร์ ถูกตรวจสอบโดยวิธี agarose gel electrophoresis และ ย้อมด้วยสี ethidium bromide ได้เลือกใช้ primer 3 คู่ ด้วยกันคือ ไพรเมอร์ต่อยีน GAG, ENV และ POL ผลินผลจาก ทำพีซีอาร์ แล้วถูกตรวจยืนยันโดยใช้วิธี Dot blot หรือ Southern blot โดยใช้ oliogonucleotide probe ที่ติดฉลากด้วย (32)p ส่วนการตรวจวิเคราะห์ผลิตผลที่ได้จากการเพิ่มขยาย พบว่าจากการวิเคราะห์สิ่งส่งตรวจจากผู้ติดเชื้อจำนวน 100 ราย ได้ผลบวกกับ primer GAG เพียง 66 ราย ส่วนที่ให้ผลลบได้นำไปทำการตรวจกับ primer ENV ซึ่งให้ผลบวกเพิ่มอีก 27 ราย รวมเป็น 93 ราย จากสิ่ง ส่งตรวจทั้งสิ้นจำนวน 100 ราย ส่วนผลการตรวจวิเคราะห์ โดยใช้ primer POL นั้น พบว่าให้ผลบวกกับ Retrovirus อื่น ที่ไม่ใช่ HIV-1 ด้วย การวิเคราะห์สิ่งตรวจจากผู้ที่ไม่ได้ติดเชื้อ 100 ราย โดยวิธีตรวจสอบทั้ง 2 วิธี ปรากฏว่าให้ผลลบทั้ง 100 ราย ซึ่งแสดงให้เห็นถึงความจำเพาะของวิธีที่พัฒนาขึ้น ดังนั้น วิธีดังกล่าวซึ่งประกอบด้วยพีซีอาร์ และการไฮบริไดเซชั่น ด้วยโพรบที่ติดฉลากด้วย (32)p อาจจะมีประโยชน์ในการ ตรวจหาโปรไวรัสดีเอ็นเอของไวรัสเอดส์จากเลือดของผู้ ติดเชื้อ โดยเฉพาะจากเลือดของผู้บริจาคซึ่งอยู่ในระยะเริ่ม แรกของการติดเชื้อและจากเลือดทารกที่คลอดจากแม่ที่ติด เชื้อไวรัสเอดส์ |
| บรรณานุกรม | : |
สุปภาต จิตจำนงชัย . (2539). การตรวจหาสารพันธุกรรมของเชื้อไวรัสเอดส์, โดยเทคนิค พีซีอาร์ และยืนยันผลด้วยโอลิโกนิวคลีโอไทด์โพรบ ที่ติดฉลากด้วยไอโซโทบ ((32)p).
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. สุปภาต จิตจำนงชัย . 2539. "การตรวจหาสารพันธุกรรมของเชื้อไวรัสเอดส์, โดยเทคนิค พีซีอาร์ และยืนยันผลด้วยโอลิโกนิวคลีโอไทด์โพรบ ที่ติดฉลากด้วยไอโซโทบ ((32)p)".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. สุปภาต จิตจำนงชัย . "การตรวจหาสารพันธุกรรมของเชื้อไวรัสเอดส์, โดยเทคนิค พีซีอาร์ และยืนยันผลด้วยโอลิโกนิวคลีโอไทด์โพรบ ที่ติดฉลากด้วยไอโซโทบ ((32)p)."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2539. Print. สุปภาต จิตจำนงชัย . การตรวจหาสารพันธุกรรมของเชื้อไวรัสเอดส์, โดยเทคนิค พีซีอาร์ และยืนยันผลด้วยโอลิโกนิวคลีโอไทด์โพรบ ที่ติดฉลากด้วยไอโซโทบ ((32)p). กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2539.
|
