การทดลองครั้งนี้มีวัตถุประสงค์ 1) เพื่อประเมินอัตราการรอดชีวิตของ ตัวอ่อนโคระยะก่อนการฝังตัว ภายหลังการแช่แข็งและตัดแบ่งตัวอ่อนโดยมือควบ คุมใบมีดโดยตรง ซึ่งเป็นเทคนิคแบบง่าย และ 2) เพื่อการตัดสินเพศตัวอ่อนโค ระยะก่อนการฝังตัวโดยอาศัยเทคนิคปฏิกิริยาลูกโซ่ของเอนไซม์โพลิเมอเรส ( PCR) ตัวอ่อนที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ได้จากการชะล้างตัวอ่อนภายหลังการ ปฏิสนธิเป็นเวลา 7 วัน โดยวิธีนิรศัลยธรรม จากแม่โคนมลูกผสมพันธุ์โฮลสไตน์ ฟรีเซี่ยนและพันธุ์ไทยพื้นเมือง จากนั้นนำตัวอ่อนมาแช่แข็งด้วยวิธี vitrification นำตัวอ่อนที่ได้จากการแช่แข็งแล้วมาทำการประเมินคุณภาพโดยพิจารณารูปร่าง ลักษณะ และความเสียหายของชั้นโซน่าเพลลูซิดา (zona pellucida) จากนั้นนำ ตัวอ่อนมาตัดแบ่งด้วยวิธีการแบบง่าย คือ ใช้มือควบคุมใบมีดโดยตรง ตัวอ่อน ที่ใช้ในการศึกษานี้เป็นตัวอ่อนระยะมอรูล่า (morula) ถึง ระยะแฮทบลาสโตซีส (hatehed blastocyst) ของโคนมลูกผสมพันธุ์โฮลสไตน์-ฟรีเซี่ยน จำนวน 40 ตัว อ่อน แล้วทำการประเมินการรอดชีวิตของตัวอ่อนตัดแบ่งภายหลังการเลี้ยงเป็น เวลา 12 ชั่วโมง และ 24 ชั่วโมง ภายใต้อุณหภูมิ 38.5 องศาเซลเซียส ความ ชื้นสัมพันธ์ 99 เปอร์เซ็นต์ คาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์ พบว่า ตัว อ่อนตัดแบ่งมีการรอดชีวิต เท่ากับ 55.0 และ 40.0 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ โดยตัวอ่อนที่มีคุณภาพในระดับ 1 และ 2 อัตราการรอดชีวิต สูงกว่า ระดับ 3 และ 4 คิดเป็น 68.9 กับ 18.2 เปอร์เซ็นต์ และ 51.72 กับ 9.09 เปอร์เซ็นต์ ภายหลังการเลี้ยงที่ 12 และ 24 ชั่วโมง ตามลำดับ (P<0.01) จากการศึกษาการ ตัดสินเพศตัวอ่อนโคนมลูกผสมพันธุ์โฮลสไตน์ฟรีเซี่ยนและพันธุ์ไทยพื้นเมือง จำนวนรวม 99 ตัวอ่อน โดยนำเซลล์บางส่วนที่ได้จากการตัดแบ่งด้วยวิธีใช้ มือควบคุมใบมีดโดยตรงมาทำการเพิ่มขยายยีน zfx และ zfy ด้วยเทคนิค Nested PCR พบว่า ตัวอ่อนระยะมอรูล่า ถึง ระยะแฮทบลาสโคซีส สามารถตัดสินเพศได้ 94.5 เปอร์เซ็นต์ มีสัดส่วนทางเพศระหว่างเพศผู้ต่อเพศเมียเท่ากับ 42.55 เปอร์เซ็นต์ และ 57.45 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ โดยไม่มีความแตกต่างทางสถิติ (P>0.05) การทดลองนี้สรุปได้ว่าตัวอ่อนโคแช่แข็ง ภายหลังนำมาตัดแบ่งด้วยวิธี ใช้มือควบคุมใบมีดโดยตรงซึ่งเป็นเทคนิคแบบง่าย สามารถรอดชีวิตอยู่ได้ภาย ใต้สภาพการเลี้ยงภายนอกร่างกาย โดยอัตราการมีชีวิตรอด ขึ้นกับคุณภาพตัว อ่อนและลดลงตามระยะเวลาที่เลี้ยง ส่วนการนำเซลล์ที่ได้จากการตัดแบ่งแบบ ง่ายมาตัดสินเพศ จากการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอในหลอดทดลองแบบ nested PCR สามารถให้ผลการตัดสินเพศที่มีประสิทธิภาพสูง