ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การพัฒนาวิธีการตรวจวัดปริมาณกรดไซอาลิคและไฮยาลูโรแนนในซีรั่ม

หน่วยงาน ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การพัฒนาวิธีการตรวจวัดปริมาณกรดไซอาลิคและไฮยาลูโรแนนในซีรั่ม
นักวิจัย : ดามรัศมน สุรางกูร
คำค้น : -
หน่วยงาน : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2540
อ้างอิง : http://www.thaithesis.org/detail.php?id=5431
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

ในการวิจัยนี้ได้พัฒนาเทคนิคการตรวจวัด Total sialic acid (TSA) และ Hyaluronan (HA) ในซีรั่มผู้ป่วยโรคมะเร็งเปรียบเทียบกับคนสุขภาพดี TSA เป็น สารชีวโมเลกุลที่มีความสำคัญ ในการวินิจฉัยโรค และติดตามความรุนแรงของโรคบางชนิด เช่น Salla disease, Sialuria รวมทั้งโรคมะเร็งด้วย ในปัจจุบันมีการพัฒนาเทคนิคการตรวจวัด TSA ขึ้นมากมาย periodate- resorcinol microassay เป็นเทคนิคหนึ่งที่ถูกพัฒนาขึ้นเพื่อใช้ในการตรวจวัด การวิจัยนี้ได้ ปรับปรุงเทคนิคดังกล่าว โดยศึกษาสภาวะที่เหมาะสมสำหรับการตรวจวัด TSA ในซีรั่ม โดยการหา ความเข้มข้นของ periodic acid และ resorcinol, เวลาในการทำปฏิกิริยาแต่ละขั้นตอนและปริมาตร ของซีรั่มที่เหมาะสม จากการวิจัยพบว่าความเข้มข้นของ periodic acid และ resorcinol reagent ที่เหมาะสมสำหรับการวัดปริมาณกรดไซอาลิค 40 ไมโครลิตร คือ 1.3 มิลลิโมลาร์ (50 ไมโครลิตร) และ 0.6 กรัมต่อเดซิลิตร (100 ไมโครลิตร) ตามลำดับ เวลาที่เหมาะสมสำหรับแต่ละขั้นตอนคือ 60 นาที และพบว่าต้องการปริมาณของซีรั่มเพียง 5 ไมโครลิตร ซึ่งหาค่า %CV จากการทดลอง intra- และ inter-assay ได้ 0.79% และ 4.68% ตามลำดับ นอกจาก TSA แล้วการวิจัยนี้ยังได้พัฒนาเทคนิคการตรวจวัดสารชีวโมเลกุลที่มีความสำคัญ คือ hyaluronan (HA) โดยใช้ ELISA-like assay ซึ่งเป็นเทคนิคที่อาศัยความจำเพาะเจาะจงของ HA กับ biotinylated hyaluronan binding protein (B-HABP) ซึ่งทำการทดลองโดยเคลือบ HA ลงบนเพลตและเตรียม inhibition mixture (ซีรั่มหรือ HA ผสมกับ B-HABP) ในหลอดพลาสติกจาก นั้นเติมลงไปในเพลต B-HABP ที่เหลือจะจับกับ HA บนเพลต หลังจากนั้นสามารถติดตาม B-HABP โดย ใช้ enzyme-conjugate mouse anti-biotin แล้วตรวจหาปริมาณแอนติไบโอตินที่จับอยู่บนเพลต โดยการวัดความเข้มของสีที่เกิดขึ้น ซึ่งวิธีการเดิมในการตรวจวัดมีขั้นตอนการเตรียม inhibition mixture เป็นแบบใช้ 2 ขั้นตอนซึ่งเป็นวิธีการที่ยุ่งยาก และทุกขั้นตอนของปฏิกิริยาต้องทำที่ 37(+,ฐ)C ด้วยในการวิจัยนี้ได้ทำการหาสภาวะที่เหมาะสมสำหรับ inhibition mixture และอุณหภูมิ สำหรับการทดลอง ในแต่ละขั้นตอนของ ELISA-like assay จากการวิจัยพบว่า สภาวะที่เหมาะสม สำหรับ inhibition mixture คือเตรียมไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ก่อนนำไปใช้โดย ไม่จำเป็นต้องใช้ 2 ขั้นตอนในการเตรียมและพบว่าสามารถทำการทดลองทุกขั้นตอนได้ที่อุณหภูมิ ห้อง ผลการทดลองที่ได้ไม่แตกต่างจากการทดลองที่ 37(+,ฐ)C นอกจากนั้นพบว่าปริมาณโปรตีนมีผล รบกวนการทดลองเล็กน้อย แต่อย่างไรก็ตามเพื่อให้ผลการทดลองออกมาถูกต้อง ในการนำเทคนิคนี้ ไปใช้ในการตรวจวัด biological fluids อื่นๆ จึงควรทราบปริมาณโปรตีนเพื่อควบคุมปริมาณโปรตีน ใน standard ให้ใกล้เคียงกับใน biological fluid นั้นก่อนทำการตรวจวัด วิธีนี้มีค่า %CV จาก intra- และ inter-assay ได้ 3.35% และ 6.02% ตามลำดับ จากการศึกษาระดับ TSA (49.4(+,ฏ) 4.6 mg/dl) และ HA (64.55(+,ฏ) 32.76 ng/ml) ในซีรั่มคนสุขภาพดี พบว่ามีระดับต่ำกว่าระดับ (TSA, 74.93(+,ฏ)32.76 mg/dl) และ (HA, 417.22(+,ฏ)344.28 ng/ml) ในผู้ป่วยโรคมะเร็ง อย่างมีนัยสำคัญ (p<0.0001) จากการทดลองสรุปได้ว่าเทคนิค periodate-resorcinol microassay และ ELISA-like assay สามารถใช้เพื่อตรวจวัดสารบ่งชี้โรคมะเร็งบางชนิดได้ ซึ่งเป็นวิธีที่ง่าย รวดเร็ว และใช้สาร เคมีรวมทั้งซีรั่มในปริมาณน้อย จึงน่าจะมีความเหมาะสมสำหรับการนำมาใช้ตรวจวัด TSA และ HA ใน biological fluids และ tissue extract

บรรณานุกรม :
ดามรัศมน สุรางกูร . (2540). การพัฒนาวิธีการตรวจวัดปริมาณกรดไซอาลิคและไฮยาลูโรแนนในซีรั่ม.
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย.
ดามรัศมน สุรางกูร . 2540. "การพัฒนาวิธีการตรวจวัดปริมาณกรดไซอาลิคและไฮยาลูโรแนนในซีรั่ม".
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย.
ดามรัศมน สุรางกูร . "การพัฒนาวิธีการตรวจวัดปริมาณกรดไซอาลิคและไฮยาลูโรแนนในซีรั่ม."
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2540. Print.
ดามรัศมน สุรางกูร . การพัฒนาวิธีการตรวจวัดปริมาณกรดไซอาลิคและไฮยาลูโรแนนในซีรั่ม. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2540.