ฟีนิลอะลานีดีไฮโดรจิเนส (EC 1.4.1.20) เป็นเอนไซม์ในกลุ่มอะมิโนแอซิดดีไฮโดรจิเนสเร่งปฏิกิริยาการดึงหมู่อะมิโนจากแอล-ฟีนิลอะลานีนให้ผลิตภัณฑ์เป็นฟีนิลไพรรูเวทและแอมโมเนีย โดยเป็นปฏิกิริยาที่ผันกลับได้ที่มีไพริดีนนิวคลีโอไทด์เป็นโคเอนไซม์ กลุ่มวิจัยของเราได้ศึกษาฟีนิลอะลานีนดีไฮโดรจิเนสจาก ~iAcinetobacter lwoffii~i และพบว่านอกจากใช้แอล-ฟีนิลอะลานีนเป็นสับสเตรทแล้ว ยังสามารถใช้แอล-เมไธโอนีน แอล-ทริปโตเฟนและแอล-นอร์ลูซีนเป็นสับสเตรทสำหรับปฏิกิริยา oxidative deamination ได้ด้วย นอกจากนั้นยังพบว่าเอนไซม์นี้ไม่สูญเสียแอคติวิตีเมื่อบ่มที่ 55 องศาเซลเซียงที่ pH 7.4 เป็นเวลา10 นาที ด้วยเหตุนี้จึงอาจเป็นไปได้ที่จะใช้ฟีนิลอะลานีนดีไฮโดรจิเนสจาก ~iA. lwoffii~iเพื่อผลิตกรดอะมิโนรูปแบบแอลชนิดต่างๆ เนื่องจากมีการศึกษานิวคลีโอไทด์ของยีนฟีนิลอะลานีนดีไฮโดรจิเนส จาก ~iA. lwoffii ไว้แล้ว ดังนั้นงานวิจัยครั้งนี้จึงทำการโคลนยีนฟีนิลอะลานีนดีไฮโดรจิเนส จาก ~iA. lwoffii~i เข้าสู่ ~iE. coli~i BL21(DE3) และ~iE. coli~i BL21(DE3)pLysS โดยใช้ expression vector (pET-17b) เมื่อวิเคราะห์สารละลายเอนไซม์หยาบที่ได้จากรีคอมบีแนนท์โคลน พบว่าเอนไซม์มีค่าแอคติวิตีจำเพาะอยู่ในช่วง 0.81 - 4.46 หน่วยต่อมิลลิกรัมโปรตีน แอคติวิตีจำเพาะสูงสุดของโคลนที่ได้มากกว่าแอคติวิตีจำเพาะจาก ~iA. lwoffii~i 55.75 เท่า ภาวะที่เหมาะสมในการเหนี่ยวนำให้เกิดการแสดงออกของยีนฟีนิลอะลานีนดีไฮโดรจิเนสคือ เหนี่ยวนำด้วย IPTG 0.4 มิลลิโมลาร์เป็นเวลา 8 ชั่วโมง การทดสอบความเสถียรของการแสดงออกของยีนฟีนิลอะลานีนดีไฮโดรจิเนสในเซลล์เจ้าบ้าน ~iE. coli~i BL21(DE3) โดยเพาะเชื้อต่อช่วงโคลนที่มีแอคติวิตีของเอนไซม์สูงสุดวันต่อวันเป็นเวลา 20 วัน พบว่าการเพาะเชื้อต่อช่วงมีผลให้การแสดงออกของยีนฟีนิลอะลานีนดีไฮโดรจิเนสลดลง เมื่อนำเอนไซม์มาทำให้บริสุทธิ์โดยการตกตะกอนด้วยเกลือแอมโมเนียมซัลเฟตและแยกโดยโครโมโตกราฟฟีคอลัมน์ดีอีเออี-โทโยเพิร์ล พบว่ามีแอคติวิตีคงเหลือ 29.45 เปอร์เซ็นต์และบริสุทธิ์ขึ้น 5.19 เท่า ในปฏิกิริยา oxidative deamination เอนไซม์มีความจำเพาะสูงมากต่อแอล-ฟีนิลอะลานีน ส่วน reductive amination เอนไซม์มีความจำเพาะต่อ (+,a)-ketocaproate,(+,a)-keto-(+,g)-methiol-n-butyrate, (+,a)-ketovalerate และ (+,a)-ketoisocaproateสูงกว่าฟีนิลไพรูเวท 5.96, 4.12, 3.84 และ 3.15 เท่า ตามลำดับ เอนไซม์ไม่สูญเสียแอคติวิตีเมื่อบ่มที่ 30 องศาเซลเซียส pH 9.5 เป็นเวลา 4 ชั่วโมง และยังคงมีแอคติวิตีเหลืออยู่ 50 เปอร์เซ็นต์ เมื่อบ่มเป็นเวลา 12 ชั่วโมง เมื่อนำเอนไซม์ไปใช้ผลิตกรดอะมิโนรูปแบบแอลชนิดต่างๆ จากสับสเตรทที่เป็นกรดคีโต พบว่าได้ผลผลิตในช่วง 36.0 - 72.2 เปอร์เซ็นต์