ทำการโคลน และแสดงออกของยีนตัวยับยั้งเซรีนโปรติเนสจากกุ้งกุลาดำที่มีKazal comain จำนวน 5 โดเมน ใน ~iEscherichia coli~i สายพันธุ์ Rosetta (DE3)pLysS และใช้ pET-22b(+) เป็นเวคเตอร์ การทดลองนี้ทำการแสดงออกของตัวยับยั้งเซรีนโปรติเนสโดยตัดส่วนที่คาดว่าเป็น signal sequence ออก โดยยีนนี้มีบริเวณ open readingframe ขนาด 747 เบส ซึ่งแปลรหัสให้โปรตีนที่มีกรดอะมิโนจำนวน 248 ตัว แล้วโคลนเข้าสู่เวคเตอร์ระหว่าง ~ipelB~i signal sequnce และ His(+,ท)Tag จากการวิเคราะห์โปรตีนที่ได้จากการแสดงออก พบโปรตีนที่คาดว่าน่าจะเป็นรีรอมบิแนนท์ของตัวยับยั้งเซรีนโปรติเนสในรูปของ inclusion body ภายในเซลล์ของ ~iE.coli~i ที่มี pET-22b(+)SPI อยู่ และได้ยืนยันการแสดงออกของยีนด้วยการทำ Western blot analysis ทำการละลาย inclusion body โดยการใช้denaturing condition และ nondenaturing condition ซึ่งพบว่าแอคติวิตีในการยับยั้งโปรติเนสของการใช้ denaturing condition มีค่าต่ำกว่าการใช้ nondenaturing conditionประมาณ 2 เท่า ดังนั้นจึงเลือกใช้ nondenaturing condition เพื่อทำให้โปรตีนรีคอมบิแนนท์บริสุทธิ์โดยทำการแยกให้บริสุทธิ์ด้วยวิธีคอลัมน์โครมาโทกราฟีโดยใช้ Sephandex G-100ซึ่งพบว่า รีคอมบิแนนท์ของตัวยับยั้งเซรีนโปรติเนสมีความบุสุทธิ์เพิ่มขึ้น 1.03 เท่า จากการหามวลโมเลกุลของโปรตีนด้วยวิธี MALDI-TOF Spectrometry พบว่าโปรตีนมีขนาด 29.065 กิโลดาลตันและเมื่อศึกษาแอคติวิตีในการยับยั้งโปรติเนสพบว่าโปรตีนรีคอมบิแนนท์ที่ทำให้บริสุทธิ์มีแอคติวิตีในการยับยั้ง subtilisin, elastase ได้ดีและยับยั้ง trypsin ได้ต่ำกว่า แต่ไม่สามารถยับยั้ง chymotrysin ค่าคงที่ในการยับยั้งของ subtilisin inhibitor complex และelastase inhibitor complex เท่ากับ 0.62 และ 3.16 นาโนโมลาร์ ตามลำดับ แสดงให้เห็นว่าโปรตีนรีคอมบิแนนท์มีประสิทธิภาพสูงในการยับยั้ง subtilisin และ elastase