| ชื่อเรื่อง | : | การผลิตอะลานีนโดยการทรานส์ฟอร์มยีนอะลานีนดีไฮโดรจิเนสและฟอร์เมตดีไฮโดรจิเนสเข้าสู่ ~iEscherichia coli~i |
| นักวิจัย | : | รุจิรัตน์ หาตรงจิตต์ |
| คำค้น | : | ALANINE DEHYDROGENASE , FORMATE DEHYDROGENASE , CO-TRANSFORMATION , HETEROLOGOUS GENE |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2547 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=1082547000793 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | อะลานีนดีไฮโดรจิเนส (EC 1.4.1.1) เร่งปฏิกิริยาการดึงหมู่อะมิโนจากแอล-อะลานีนให้ผลิตภัณฑ์คือแอมโมเนียม, ไพรูเวท และ NADH ซึ่งเป็นปฏิกิริยาที่ผันกลับได้และต้องการNAD('+) เป็นโคเอนไซม์จากปฏิกิริยาดังกล่าวจึงได้มีการนำเอนไซม์นี้มาใช้ในการสังเคราะห์อะลานีนและสารอนุพันธ์ รวมทั้งนำมาประยุกต์ใช้ในการวินิจฉัยโรค ในการนำเอนไซม์นี้มาใช้ในการผลิตอะลานีนในระดับอุตสาหกรรมประสบกับปัญหาราคาของโคเอนไซม์ที่สูงมาก ดังนั้นจึงได้มีการเพิ่มประสิทธิภาพโดยใช้ระบบการทำปฏิกิริยาร่วมกับเอนไซม์ที่สามารถรีเจนเนอเรตโคเอนไซม์ได้ อะลานีนดีไฮโดรจิเนสที่แยกได้จาก ~iAeromonas hydrophila~iมีแอคติวิตีและความจำเพาะต่อสับสเตรทสูงเหมาะสมสำหรับใช้ผลิตอะลานีน นอกจากนี้ได้มีการโคลนยีนของเอนไซม์เข้าสู่ ~iE. coli~i JM109 โดยใช้เวคเตอร์ pUC18 เพื่อที่จะเพิ่มประสิทธิภาพในการผลิตอะลานีนโดยทำให้มีแอคติวิตีของอะลานีนดีไฮโดรจิเนสสูงขึ้น และสามารถรีเจนเนอเรตโคเอนไซม์ได้เองภายในเซลล์เพียงเซลล์เดียว การนำเข้ายีน ~ialadh~iและ ~ifdh~i สู่ ~iE. coli~i BL21(DE3) โดย 2 วิธีคือ 1) สร้างโคลนที่มี heterologousgene ของ ~ialadh~i และ ~ifdh~i บนแวคเตอร์ pET-17b (pETAF และ pETFA) 2) ทำการทรานส์ฟอร์มร่วมของยีน ~ialadh~i และ ~ifdh~i ภายใต้โปรโมเตอร์ T7 โดยใช้เวคเตอร์pET-17b และ pSY343 (pETAlaDH/pSYFDH) หรือ เวคเตอร์ pMPM-K3) และ pET-17b(pMPMAlaDH/pETFDH) ตามลำดับ พบว่าแอคติวิตีของอะลานีนดีไฮโดรจิเนสและฟอร์เมตดีไฮโดรจิเนสของโคลนที่มี heterologous gene และโคลนที่ได้จากการทรานส์ฟอร์มร่วมสูงขึ้นเมื่อเทียบกับโคลนเดิม (pUCAlaDH และ pUCFDH) แม้ว่าแอคติวิตีของเอนไซม์ทั้งสองจะลดลงเมื่อเทียบกับโคลนที่มียีนเดียว (pUCAlaDH, pMPMAlaDH, pUCFDH) สำหรับการผลิตอะลานีนของทุกโคลนพบว่าไม่แตกต่างกันโดยมีผลผลิตประมาณร้อยละ 50 และอัตราส่วนของอะลานีนรูปแบบ D:L ประมาณ 1.6:1 |
| บรรณานุกรม | : |
รุจิรัตน์ หาตรงจิตต์ . (2547). การผลิตอะลานีนโดยการทรานส์ฟอร์มยีนอะลานีนดีไฮโดรจิเนสและฟอร์เมตดีไฮโดรจิเนสเข้าสู่ ~iEscherichia coli~i.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. รุจิรัตน์ หาตรงจิตต์ . 2547. "การผลิตอะลานีนโดยการทรานส์ฟอร์มยีนอะลานีนดีไฮโดรจิเนสและฟอร์เมตดีไฮโดรจิเนสเข้าสู่ ~iEscherichia coli~i".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. รุจิรัตน์ หาตรงจิตต์ . "การผลิตอะลานีนโดยการทรานส์ฟอร์มยีนอะลานีนดีไฮโดรจิเนสและฟอร์เมตดีไฮโดรจิเนสเข้าสู่ ~iEscherichia coli~i."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2547. Print. รุจิรัตน์ หาตรงจิตต์ . การผลิตอะลานีนโดยการทรานส์ฟอร์มยีนอะลานีนดีไฮโดรจิเนสและฟอร์เมตดีไฮโดรจิเนสเข้าสู่ ~iEscherichia coli~i. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2547.
|
