ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การผลิตอะลานีนโดยการทรานส์ฟอร์มยีนอะลานีนดีไฮโดรจิเนสและฟอร์เมตดีไฮโดรจิเนสเข้าสู่ ~iEscherichia coli~i

หน่วยงาน ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การผลิตอะลานีนโดยการทรานส์ฟอร์มยีนอะลานีนดีไฮโดรจิเนสและฟอร์เมตดีไฮโดรจิเนสเข้าสู่ ~iEscherichia coli~i
นักวิจัย : รุจิรัตน์ หาตรงจิตต์
คำค้น : ALANINE DEHYDROGENASE , FORMATE DEHYDROGENASE , CO-TRANSFORMATION , HETEROLOGOUS GENE
หน่วยงาน : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2547
อ้างอิง : http://www.thaithesis.org/detail.php?id=1082547000793
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

อะลานีนดีไฮโดรจิเนส (EC 1.4.1.1) เร่งปฏิกิริยาการดึงหมู่อะมิโนจากแอล-อะลานีนให้ผลิตภัณฑ์คือแอมโมเนียม, ไพรูเวท และ NADH ซึ่งเป็นปฏิกิริยาที่ผันกลับได้และต้องการNAD('+) เป็นโคเอนไซม์จากปฏิกิริยาดังกล่าวจึงได้มีการนำเอนไซม์นี้มาใช้ในการสังเคราะห์อะลานีนและสารอนุพันธ์ รวมทั้งนำมาประยุกต์ใช้ในการวินิจฉัยโรค ในการนำเอนไซม์นี้มาใช้ในการผลิตอะลานีนในระดับอุตสาหกรรมประสบกับปัญหาราคาของโคเอนไซม์ที่สูงมาก ดังนั้นจึงได้มีการเพิ่มประสิทธิภาพโดยใช้ระบบการทำปฏิกิริยาร่วมกับเอนไซม์ที่สามารถรีเจนเนอเรตโคเอนไซม์ได้ อะลานีนดีไฮโดรจิเนสที่แยกได้จาก ~iAeromonas hydrophila~iมีแอคติวิตีและความจำเพาะต่อสับสเตรทสูงเหมาะสมสำหรับใช้ผลิตอะลานีน นอกจากนี้ได้มีการโคลนยีนของเอนไซม์เข้าสู่ ~iE. coli~i JM109 โดยใช้เวคเตอร์ pUC18 เพื่อที่จะเพิ่มประสิทธิภาพในการผลิตอะลานีนโดยทำให้มีแอคติวิตีของอะลานีนดีไฮโดรจิเนสสูงขึ้น และสามารถรีเจนเนอเรตโคเอนไซม์ได้เองภายในเซลล์เพียงเซลล์เดียว การนำเข้ายีน ~ialadh~iและ ~ifdh~i สู่ ~iE. coli~i BL21(DE3) โดย 2 วิธีคือ 1) สร้างโคลนที่มี heterologousgene ของ ~ialadh~i และ ~ifdh~i บนแวคเตอร์ pET-17b (pETAF และ pETFA) 2) ทำการทรานส์ฟอร์มร่วมของยีน ~ialadh~i และ ~ifdh~i ภายใต้โปรโมเตอร์ T7 โดยใช้เวคเตอร์pET-17b และ pSY343 (pETAlaDH/pSYFDH) หรือ เวคเตอร์ pMPM-K3) และ pET-17b(pMPMAlaDH/pETFDH) ตามลำดับ พบว่าแอคติวิตีของอะลานีนดีไฮโดรจิเนสและฟอร์เมตดีไฮโดรจิเนสของโคลนที่มี heterologous gene และโคลนที่ได้จากการทรานส์ฟอร์มร่วมสูงขึ้นเมื่อเทียบกับโคลนเดิม (pUCAlaDH และ pUCFDH) แม้ว่าแอคติวิตีของเอนไซม์ทั้งสองจะลดลงเมื่อเทียบกับโคลนที่มียีนเดียว (pUCAlaDH, pMPMAlaDH, pUCFDH) สำหรับการผลิตอะลานีนของทุกโคลนพบว่าไม่แตกต่างกันโดยมีผลผลิตประมาณร้อยละ 50 และอัตราส่วนของอะลานีนรูปแบบ D:L ประมาณ 1.6:1

บรรณานุกรม :
รุจิรัตน์ หาตรงจิตต์ . (2547). การผลิตอะลานีนโดยการทรานส์ฟอร์มยีนอะลานีนดีไฮโดรจิเนสและฟอร์เมตดีไฮโดรจิเนสเข้าสู่ ~iEscherichia coli~i.
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย.
รุจิรัตน์ หาตรงจิตต์ . 2547. "การผลิตอะลานีนโดยการทรานส์ฟอร์มยีนอะลานีนดีไฮโดรจิเนสและฟอร์เมตดีไฮโดรจิเนสเข้าสู่ ~iEscherichia coli~i".
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย.
รุจิรัตน์ หาตรงจิตต์ . "การผลิตอะลานีนโดยการทรานส์ฟอร์มยีนอะลานีนดีไฮโดรจิเนสและฟอร์เมตดีไฮโดรจิเนสเข้าสู่ ~iEscherichia coli~i."
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2547. Print.
รุจิรัตน์ หาตรงจิตต์ . การผลิตอะลานีนโดยการทรานส์ฟอร์มยีนอะลานีนดีไฮโดรจิเนสและฟอร์เมตดีไฮโดรจิเนสเข้าสู่ ~iEscherichia coli~i. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2547.