| ชื่อเรื่อง | : | การโคลนและศึกษาลักษณะสมบัติของไคติเนสจาก ~iBacillus licheniformis~i RN01 และการศึกษาเปรียบเทียบกับไคติเนสชนิดอื่น |
| นักวิจัย | : | สุรเกติ์ เนาสราญวงศ์ |
| คำค้น | : | CHITINASE , ~iBacillus licheniformis~i RN01 , CLONING , CHARACTERIZATION , COMPARATIVE STUDY |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2547 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=1082547000804 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | ไคติเนส (EC 3.2.1.14) เป็นเอนไซม์ในกลุ่มไกลโคซิลไฮโดรเลสที่เร่งปฏิกิริยาการย่อยสลายไคติน ~iBacillus licheniformis~i RN01 ที่แยกได้จากแหล่งน้ำพุร้อนจังหวัดระนอง ผลิตเอนไซม์ไคนิเนสได้สูงสุดในวันที่ 2 เมื่อเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อcolloidal chitin minimum medium เอนไซม์ที่ผลิตได้สามารถทำงานได้ดีในช่วง pH ตั้งแต่pH 6 - 10 และเอนไซม์ทำงานได้ดีที่อุณหภูมิ 50 60 (+,ฐ)C สับสเตรทที่เอนไซม์ย่อยได้ดีที่สุดคือ PNAC (partial-N-acetylated chitin) รองลงมาคือ คอลลอยด์ดัลไคติน,(+,b)-ไคติน และ powder chitin ตามลำดับ ผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการย่อยคอลลอยด์ดัลไคตินได้chitobiose เป็นผลิตภัณฑ์หลัก เมื่อทำการแยกโปรตีนโดย SDS-PAGE และย้อมแอคติวิตีพบโปรตีนที่มีไคติเนสแอคติวิตี 3 แถบที่มีขนาดต่าง ๆ คือ 70, 65 และ 58 กิโลดาลตันตามลำดับ เมื่อนำ genomic DNA ของ ~iBacillus licheniformis~i RN01 มาโคลนยีนไคติเนสโดยวิธี PCR cloning พบว่า DNA ที่โคลนได้มีนิวคลีโอไทด์ทั้งหมด 1,964 นิวคลีโอไทด์ สามารถtranslate ออกมาเป็นกรดอะมิโนได้ 598 กรดอะมิโน ซึ่งมีขนาดประมาณ 66,134 ดาลตัน (Da)มี isoelectric point เท่ากับ 5.17 เอนไซม์ไคติเนสที่โคลนได้ให้ชื่อว่า ChiRN1 พบว่าเอนไซม์ที่โคลนได้ประกอบด้วยโดเมน 3 โดเมน ได้แก่ catalytic domain (CatD), fibronectintype III-like domain (FnIIID) และ chitin binding domain (ChBD) เมื่อทำการศึกษาสมบัติบางประการของเอนไซม์ ChiRN1 พบว่าเอนไซม์สามารถทำงานได้ดีในช่วง pH ตั้งแต่ pH 6 -10 อุณหภูมิที่เอนไซม์ทำงานได้ดีอยู่ที่ 60 - 70 (+,ฐ)C สับสเตรตที่เอนไซม์ย่อยได้ดีที่สุดคือ PNAC รองลงมาคือ คอลลอยด์ดัลไคติน และ (+,b)-ไคติน ผลจาก SDS-PAGE และย้อมสีแอคติวิตีพบแถบโปรตีนที่มีไคติเนสแอคติวิตี 3 แถบ มีขนาด 70, 65 และ 58 kDa เหมือนกับ ~iB. licheniformis~iRN01 และพบว่าผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการย่อยสลายคอลลอยด์ดัลไคตินได้ chitobiose เป็นผลิตภัณฑ์หลักและเมื่อทำไคติเนสลูกผสมโดยนำเอาส่วน FnIIID และ ChBD ของ ChiRN1 ไปต่อข้างหลังเอนไซม์Chi60 ที่มี 2 โดเมน ได้แก่ N-terminal domain และ catalytic domain พบว่าเอนไซม์ลูกผสมมีกรดอะมิโนจำนวน 708 กรดอะมิโน ผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการย่อยสลายคอลลอยด์ดัลไคตินด้วยเอนไซม์ลูกผสมเป็น chitobiose เพียงอย่างเดียว เช่นเดียวกับเอนไซม์ Chi60 สรุปได้ว่า FnIIId และChBD ที่ต่อเพิ่มไปบนเอนไซม์ Chi60 ไม่เปลี่ยนแปลงอัตราส่วนระหว่าง monomer และ dimer ของผลิตภัณฑ์ |
| บรรณานุกรม | : |
สุรเกติ์ เนาสราญวงศ์ . (2547). การโคลนและศึกษาลักษณะสมบัติของไคติเนสจาก ~iBacillus licheniformis~i RN01 และการศึกษาเปรียบเทียบกับไคติเนสชนิดอื่น.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. สุรเกติ์ เนาสราญวงศ์ . 2547. "การโคลนและศึกษาลักษณะสมบัติของไคติเนสจาก ~iBacillus licheniformis~i RN01 และการศึกษาเปรียบเทียบกับไคติเนสชนิดอื่น".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. สุรเกติ์ เนาสราญวงศ์ . "การโคลนและศึกษาลักษณะสมบัติของไคติเนสจาก ~iBacillus licheniformis~i RN01 และการศึกษาเปรียบเทียบกับไคติเนสชนิดอื่น."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2547. Print. สุรเกติ์ เนาสราญวงศ์ . การโคลนและศึกษาลักษณะสมบัติของไคติเนสจาก ~iBacillus licheniformis~i RN01 และการศึกษาเปรียบเทียบกับไคติเนสชนิดอื่น. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2547.
|
