ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การโคลนและการแสดงออกของยีนกลูโคสไอโซเมอเรสจากStreptomyces sp.190-1 ใน Escherichia coli

หน่วยงาน ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การโคลนและการแสดงออกของยีนกลูโคสไอโซเมอเรสจากStreptomyces sp.190-1 ใน Escherichia coli
นักวิจัย : รัชนี ไสยประจง
คำค้น : GLUCOSE ISOMERASE , GENE CLONING , Streptomyces
หน่วยงาน : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2536
อ้างอิง : http://www.thaithesis.org/detail.php?id=1082536000126
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

ได้ทำการโคลนยีนกลูโคสไอโซเมอเรสจาก Streptomycessp.190-1 ใน Escherichia coli HB101 โดยใช้พลาสมิด pUC18 หรือpUC19 เป็นพลาสมิดพาหะจากการคัดเลือกทรานสฟอร์แมนท์บนอาหารเลี้ยงเชื้อ MacConkey agar base ที่มีไซโลสและยาปฏิชีวนะแอมพิซีลลิน พบ 1โคลน ที่มีความเสถียรให้ชื่อว่าโคลน 289 และรีคอมบิแนนต์พลาสมิดที่ได้ให้ชื่อว่า pUR289 เมื่อนำ E.coli HB101 ที่มีรีคอมบิแนนต์พลาสมิด PUR289หรือพลาสมิด pUC18 มาเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อเหลวสูตร LB ที่มีไซโลสเป็นองค์ประกอบ พบว่าแอคติวิตีจำเพราะของกลูโคสไอโซเมอเรสมีค่าเท่ากับ 27.9 และ 11.0 นาโนโมล/นาที/มก.ของโปรตีน ตามลำดับ เมื่อใช้IPTG เป็นตัวเหนี่ยวนำในการสร้างเอนไซม์โดย E.coli HB101 ที่มีรีคอมบิแนนต์พลาสมิด pUR289 พบว่า มีแอคติวีตีจำเพาะเท่ากับ 33.3นาโนโมล/นาที/มก.ของโปรตีน เมื่อทำการศึกษาขนาดของดีเอ็นเอที่ใส่เข้าไป(inserted DNA) ในรีคอมบิแนนต์พลาสมิด pUR289 วิเคราะห์โดยอะกาโรสเจลอิเล็กโทรโฟริซิสพบว่ามีขนาด 1.8 กิโลเบส จากการศึกษาแผนที่เรสทริกชัน(Restriction map) พบว่ามีตำแหน่งตัดจำเพาะของเรสทริกชันเอนไซม์BamHI HindIII และ PstI จากการทำโคลนย่อย พบว่าชิ้นส่วนHindIII-HindIII มีความจำเป็นต่อการแสดงออกของยีน(geneespression) ในขณะที่ชิ้นส่วน EcoRI-PStI ไม่มีความจำเป็นต่อการแสดงออกของยีนและดีเอ็นเอขนาดเล็กสุดที่สามารถแสดงออกได้มีขนาดประมาณ 1.4 กิโลเบส จากการทำ southern blot hybridization พบว่าชิ้นส่วนPstI-XbaI ของดีเอ็นเอที่ใส่เข้าไปสามารถไฮบริไดซ์กับโครโมโซมอลดีเอ็นเอของ Streptomyces sp.190-1 ที่ตัดด้วย BamHI

บรรณานุกรม :
รัชนี ไสยประจง . (2536). การโคลนและการแสดงออกของยีนกลูโคสไอโซเมอเรสจากStreptomyces sp.190-1 ใน Escherichia coli.
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย.
รัชนี ไสยประจง . 2536. "การโคลนและการแสดงออกของยีนกลูโคสไอโซเมอเรสจากStreptomyces sp.190-1 ใน Escherichia coli".
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย.
รัชนี ไสยประจง . "การโคลนและการแสดงออกของยีนกลูโคสไอโซเมอเรสจากStreptomyces sp.190-1 ใน Escherichia coli."
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2536. Print.
รัชนี ไสยประจง . การโคลนและการแสดงออกของยีนกลูโคสไอโซเมอเรสจากStreptomyces sp.190-1 ใน Escherichia coli. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2536.