การศึกษานี้มีจุดหมายเพื่อประเมินวิธี? nested PCR ในการตรวจ ?????วินิจฉัยโรคพิษสุนัขบ้าทั้งในแง่ความไวและความจำเพาะของวิธีโดยนำ ?????ตัวอย่างที่ต้องการตรวจมาสกัด RNA และเปลี่ยน RNA ให้เป็น cDNA โดย ?????อาศัยปฏิกิริยา reverse transcription ซึ่ง cDNA ที่ถูกสร้างขึ้นนี้จะใช้ ?????เป็นแม่พิมพ์สำหรับการเพิ่มปริมาณ DNA โดยเทคนิค PCR 2 ขั้นตอนต่อไปซึ่ง ?????เป็นการเพิ่มความไวมากกว่า PCR เพียงขั้นตอนเดียว และเป็นการยืนยัน ?????ความจำเพาะโดยไม่อาศัย hybridization สิ่งส่งตรวจที่ใช้ในการศึกษานี้ได้แก่ สมองสุนัข ที่นำมาตรวจหาไวรัส ?????พิษสุนัขบ้าที่สถานเสาวภาสภากาชาดไทย? จำนวน 500 ตัวอย่าง และสมอง ?????สุนัขจำนวน 20 ตัวอย่างซึ่งเป็นสมองบวก 10 และลบ 10 ตัวอย่าง แล้วตั้ง ?????ทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้อง (28-33 องศาเซลเซียส) ที่เวลาต่าง ๆ กันในระยะ ?????ตั้งแต่ 2, 6, 12, 24, 48 และ 72 ชม. โดยเปรียบเทียบผลการตรวจ ?????ของ?nested?PCR กับวิธีที่ใช้ตรวจประจำวันคือ Fluorescent Antibody ?????Test (FAT) และ Mouse Inoculation Test (MIT) จากผลการตรวจสมอง 500 ตัวอย่าง พบว่า nested PCR มีความ ?????ไวและความจำเพาะเทียบเท่ากับ MIT ซึ่งเป็นวิธีมาตราฐานในการตรวจ ?????ยืนยันการวินิจฉัยโรคพิษสุนัขบ้าทางห้องปฏิบัติการ โดยที่ FAT ให้ผลลบปลอม ?????1?ตัวอย่าง นอกจากนี้ nested PCR ยังสามารถตรวจไวรัสในสมองสุนัข ?????แม้ว่าจะทิ้งไว้นานถึง 72 ชม. ก็ตาม ซึ่งการตรวจด้วย FAT และ MIT จะ ?????เริ่มให้ผลลบปลอมตั้งแต่ช่วงเวลา 24 และ 48 ชม. ตามลำดับ สำหรับปริมาณ? virus? specific? RNA? และ? total? RNA ?????(brain? RNA? และ? specific virus RNA) ที่น้อยที่สุดที่วิธี nested ?????PCR สามารถตรวจได้คือ 8 pg และ 0.5 ng ตามลำดับ วิธี nested PCR สามารถนำมาใช้เป็นวิธีตรวจยืนยันในกรณีที่ FAT ?????ให้ผลลบได้