Agrobacterium tumefaciens เชื้อก่อโรคปุ่มปมมงกุฏในพืชใบเลี้ยงคู่ถูกใช้เพื่อการศึกษาดูค่าปริมาณDNA (DNA content) โดยมีจุดประสงค์เพื่อ 1) ศึกษาความเปลี่ยนแปลงของ DNA content โดยเทคนิค flow cytometric analysis ในแบคทีเรีย NTL4, katA mutant, catE mutant, และ katAcatE double mutant เมื่ออยู่ในช่วงการเจริญในระยะโตเต็มวัยและระยะที่กำลังมีการแบ่งเซลล์ 2) เพื่อศึกษาศึกษาความเปลี่ยนแปลงของ DNA content โดยเทคนิค flow cytometric analysis ในแบคทีเรียดังกล่าวซึ่งถูกเหนี่ยวนำด้วยอนุมูลอิสระ แบคทีเรียทุกสายพันธุ์ถูกเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อชนิด Luria-Bertani ที่อุณหภูมิ 28C เซลล์จะถูกแบ่งเป็นสองส่วนในวันถัดไปหลังจากการเลี้ยงเชื้อข้ามคืนในตู้เลี้ยงเชื้อ ส่วนแรกจะถูกนำมาทำการให้อาหารใหม่เพื่อให้ได้กลุ่มเซลล์ที่อยู่ในช่วงของการแบ่งเซลล์ (exponential-phase cells; OD600 0.6, 3 h of growth) ส่วนที่สองจะถูกเก็บเข้าตู้เลี้ยงเชื้อเพื่อรอการเก็บเซลล์ในระยะโตเต็มวัย (stationary-phase cells; OD600 5, 30 h of growth) ซึ่งใช้ในการทดลองต่อไป หลังจากเก็บเซลล์ที่ได้ระยะที่ต้องการจึงนำมาทำการเตรียมเซลล์และย้อมสีด้วยสาร formaldehyde fixative และ propidium iodide ตามลำดับโดยใช้เวลาย้อมประมาณ 30 ถึง 60 นาทีก่อนนำมาวิเคราะห์ด้วยเครื่อง flow cytometer รุ่น FACSCantoTM โดยทำการวิเคราะห์นิวเคลียสจำนวน 20,000 นิวเคลียส เพื่อทำการเปรียบเทียบค่าความแปรผัน (coefficient of variance; CV) ของปริมาณ DNA ในระยะG1 ในวัฏจักรเซลล์ โดยใช้ค่าทางสถิติที่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญที่ระดับ P = 0.05 การศึกษาความแตกต่างในวัตถุประสงค์ที่สองโดยมีการเหนี่ยวนำของอนุมูลอิสระใช้วิธีการทดลองคล้ายกับการทดลองที่กล่าวมาแล้ว ผลของการศึกษานี้ไม่พบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญของปริมาณ DNA ในสถานการณ์ต่างๆที่ได้ทดสอบกล่าวคือ เมื่อมีความแตกต่างของสายพันธุ์ ระยะของการเจริญ และการถูกเหนี่ยวนำโดยอนุมูลอิสระ Agrobacterium tumefaciens, a plant pathogen bacteria causing crown gall tumors in dicotyledonous plants has been examined for their DNA content in this study. The objectives are to investigate; 1) whether there are any changes on DNA content of the bacteria wild type NTL4, katA mutant, catE mutant, and katAcatE double mutant for those of their stationary phase and exponential phase of growth using flow cytometric analysis 2) whether there are any changes on DNA content of the four strains when all of them are induced by a reactive oxygen species, H2O2. All strains of the bacteria were grown aerobically in Luria-Bertani (LB) medium at 28° C with continuous shaking at 150 rpm. The overnight cells were separated into two series, the first series were sub-cultured to ensure the synchronous growth of the exponential-phase cells (OD600 about 0.6, after 3 h of growth) and the second series were continue shaking aerobically to get the stationary-phase cells (OD600 about 5, after 30 h of growth) before they were harvested. The harvested cells of all bacterial strains were fixed with formaldehyde fixative and then strained with propidium iodide (PI) straining solution before incubated in 4°C for 30-60 minutes. All of the samples with the total of 20,000 nuclei each were analyzed with flow cytometer model FACSCantoTM. The DNA content histogram and the coefficient of variance (CV) of the G1 peak were compared statistically at the significant level P = 0.05. The similar methodologies were performed for the oxidant induction experiment. There were no significant differences of the DNA contents of all strains in a various manners such as the different strains, phases of growth, and the induction of H2O2 .