วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2554

งานวิจัยนี้ศึกษาการทำอินูลิเนสจาก Streptomyces sp. CP01 ให้บริสุทธิ์โดยเลี้ยงเชื้อในอาหารเหลวที่มีอินนูลินสกัดจากรากแก่นตะวันเป็นแหล่งคาร์บอน นำน้ำเลี้ยงเชื้อมาตกตะกอนลำดับส่วนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตความเข้มข้ม 40-80 เปอร์เซ็นต์ ตามด้วยการทำคอลัมน์โครมาโทกราฟีสี่ขั้นตอน คือแมคโคร-เพรบดีอีเออี เซฟาคริลเอส-200เอชอาร์ ที-บิวทิลไฮโดรโฟบิคอินเตอร์แอคชัน และไฮดรอกซีอะปาไทด์ ได้เอนไซม์ที่มีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้นประมาณ 67 เท่า จากการวิเคราะห์น้ำหนักโมเลกุลโดยวิธีเจลฟิลเตรชันพบว่าเอนไซม์นี้มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 73 กิโลดาลตัน และเมื่อวิเคราะห์โดยวิธีโซเดียมโดเดซิลซัลเฟตพอลิอะคริลาไมด์เจลอีเลคโทรโฟริซิสมีน้ำหนักโมเลกุลใกล้เคียงกันคือ 70.8 กิโลดาลตัน จากการศึกษาสมบัติของอินูลิเนสบริสุทธิ์พบว่าเอนไซม์มีอุณหภูมิและความเป็นกรดด่างที่เหมาะสมต่อการทำงาน คือ 55 องศาเซลเซียส และ 6.0 ตามลำดับ เอนไซม์มีความเสถียรต่ออุณหภูมิสูงถึง 50 องศาเซลเซียส และเสถียรต่อความเป็นกรดด่างในช่วงกว้างตั้งแต่ 6.0-9.0 เป็นเวลา 30 นาที จากการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการย่อยอินนูลินโดยวิธีโครมาโทกราฟฟีแบบแผ่นบางพบว่าเอนไซม์นี้เป็นเอนโดอินูลิเนส สำหรับ ค่า Km ต่ออินนูลินและซูโครส เท่ากับ 2.36 และ 40 มิลลิโมลาร์ ตามลำดับ และค่า Vmaxต่ออินนูลินและซูโครส เท่ากับ 440 และ 12.3 ไมโครโมลต่อนาทีต่อมิลลิกรัม ตามลำดับ นอกจากนี้พบว่าสารดัดแปลงกรดอะมิโน ได้แก่ เอ็น-โบรโมซัคซินิไมด์และไอโอโดอะเซตะไมด์มีผลยับยั้งแอคติวิตีของเอนไซม์ แสดงว่ากรดอะมิโนทริปโตเฟนและซีสเทอีนน่าจะเกี่ยวข้องกับบริเวณ active site ของเอนไซม์