ในการพัฒนาชุดตรวจวินิจฉัยโรคไข้เลือดออกอย่างรวดเร็ว จำเป็นต้องมีแอนติเจนที่ดีทั้งในแง่ของปริมาณและคุณภาพเพื่อใช้ในการตรวจหา แอนติบอดีต่อโปรตีนของไวรัสเด็งกี่ในซีรั่มผู้ป่วย โปรตีนแอนติเจนที่ใช้ควรมีต้นทุนในการผลิตต่อหน่วยต่ำ ผลิตได้ง่าย มีคุณสมบัติในการเป็นแอนติเจนที่ดี ทำปฏิกิริยาได้ดีกับแอนติบอดีจำเพาะ และสามารถละลายอยู่ได้แม้มีความเข้มข้นสูง ซึ่งจะเหมาะต่อการแปรรูปโปรตีนแอนติเจนเช่นการติดฉลากโปรตีนด้วยเอ็นไซม์ หรือสารเคมีอื่นๆที่จำเป็นต่อการพัฒนาชุดตรวจต่อไป ในงานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อทำการพัฒนาวิธีการผลิตหรือเตรียมโปรตีนรี คอมบิแนนต์ส่วนเปลือกหุ้ม(E) ของเด็งกี่ไวรัส ซีโรทัยป์ 2(6H-D2E) จาก E.coli เพื่อให้ได้โปรตีนที่มีคุณสมบัติเหมาะสมดังกล่าว เพื่อนำมาใช้เป็นแอนติเจนในชุดตรวจทดแทนการใช้แอนติเจนจากไวรัส ในการผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนต์จาก E.coli โปรตีน 6H-D2E จะถูกผลิตออกมาในรูปของ inclusion body ผู้วิจัยได้ทำการศึกษาและเปรียบเทียบวิธีการ refolding โปรตีน และการแยกโปรตีนให้บริสุทธิ์ 2 วิธี วิธีแรกเป็นการแยกโปรตีนให้บริสุทธิ์โดยอาศัยหลักของ immobilized affinity chromatography ภายใต้สภาวะ denaturing condition และตามด้วยการ refolding โปรตีนบริสุทธิ์นั้น อีกวิธีหนึ่งเป็นการละลายโปรตีน inclusion ด้วยสารละลาย strong denaturants และทำการเจือจางโปรตีนใน refolding buffer ก่อนเพื่อเป็นการ refold โปรตีน จากนั้นจึงแยกโปรตีนออกจากกันตามขนาดด้วย gel filtration chromatography วิธีหลังให้โปรตีน 6H-D2E มากกว่าแต่ก็มี contaminants ปนมาด้วยเช่นกัน การแยกโปรตีนด้วยวิธี IMAC และตามด้วยการ refolding โดยวิธีการเจือจางโปรตีนใน refolding buffer ที่อุณหภูมิต่ำ ก่อนจะนำมาทำให้เข้มข้นขึ้นด้วย ultrafiltration เป็นวิธีการที่พบว่าให้ผลที่ดีทั้งในแง่ของผลผลิตที่ได้ และความเข้มข้นของโปรตีน โปรตีนบริสุทธิ์ที่ได้มีการทำปฏิกิริยาที่ดีกับซีรั่มของผู้ป่วยไข้เลือดออก และโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะต่อโปรตีน E ของเด็งกี่ไวรัส โดยวิธี indirect ELISA, Western blot หรือ dot-enzyme immunoassay และไม่ทำปฏิกิริยากับซีรั่มของคนปกติ นอกจากนี้ยังพบว่าโปรตีนชุดนี้มีความเข้มข้นถึง 3 mg/ml ใน phosphate buffer saline ที่ pH 7.4 และไม่พบว่ามีการตกตะกอนหลังจากผ่านการละลายจากการแช่แข็ง ผู้วิจัยสามารถเตรียมโปรตีน 6H-D2E ได้ในปริมาณ และคุณภาพที่เหมือนเดิม จากการเตรียมหลายครั้ง แสดงว่าวิธีนี้มีความคงที่เหมือนเดิม จากการเตรียมหลายครั้ง แสดงว่าวิธีนี้มีความคงที่ และสามารพทำซ้ำได้ ขณะนี้ได้มีการนำโปรตีนรีคอมบิแนนต์ E ไปพัฒนาต่อเพื่อใช้เป็นแอนติเจนในชุดตรวจวินิจฉัยโรคไข้เลือดออกโดยบริษัท เอกชนทั้งในประเทศ และต่างประเทศ