| ชื่อเรื่อง | : | การโคลนยีน glutamine synthetase และการถ่ายยีน ascorbate peroxidase เข้าสู่หญ้าเนเปียร์แคระ (~iPennisetum purpureum~i cv. Mott) |
| นักวิจัย | : | ปาริสัชชา แสงสุวรรณ |
| คำค้น | : | - |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2546 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=1162546001578 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | ค้นลำดับเบสของยีน ~iGS~i จากฐานข้อมูล นำมาใช้ออกแบบไพรเมอร์เพื่อเพิ่มปริมาณส่วนกลางของยีน ~iGS~i จากชะคราม (~iSuaeda maritima~i) มะพร้าวนกเขา(~iSynostemon bacciformis~i) และหญ้าคาลล่า (~iDiplachne fusca~i) โดยเทคนิค RT-PCRทำให้ได้ชิ้นดีเอ็นเอขนาดประมาณ 800 คู่เบส ในชะครามและมะพร้าวนกเขา นำผลผลิตจาก RT-PCRดังกล่าวไปเพิ่มจำนวนอีกครั้งด้วยไพรเมอร์ที่อยู่ด้านใน เพื่อยืนยันว่าเป็นยีน ~iGS~i จริงได้ชิ้นดีเอ็นเอขนาดประมาณ 500 คู่เบส จากนั้นจึงโคลนชิ้นดีเอ็นเอขนาด 800 คู่เบสและหาลำดับเบส พบว่าข้อมูลลำดับเบสดังกล่าวมีความคล้ายคลึงกับยีน ~iGS2~i ในต้นบีทรูท(~iBeta vulgaris~i) ถึง 91% ทำการออกแบบไพรเมอร์ใหม่จากลำดับเบสที่ได้ เพื่อโคลนยีนที่สมบูรณ์ โดยเทคนิค RACE เมื่อรวมชิ้นดีเอ็นเอจากส่วนปลาย 5(+,ข) ปลาย 3(+,ข) และส่วนกลางเข้าด้วยกันได้ cDNA ที่สมบูรณ์ขนาด 1352 คู่เบส มีลำดับเบสตั้งแต่ตำแหน่งเริ่มต้นการแปลรหัสจนถึงรหัสจบการแปล (open reading frame, ORF) ขนาด 1296 คู่เบสเปรียบเทียบลำดับเบสของยีนที่ได้กับลำดับเบสในฐานข้อมูลพบว่าลำดับเบสดังกล่าวคล้ายคลึงกับยีน ~iGS2~i ในต้นบีทรูท 89% เพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อหญ้าเนเปียร์แคระ (~iPennisetum purpureum~i cv. Mott)และชักนำให้เกิดยอดหลายยอดในอาหารสูตร MS ที่เติม BAP 3 มิลลิกรัมต่อลิตร นำยอดที่ได้มาถ่ายยีน ~iAPX~i โดยใช้อะโกรแบคทีเรียมสายพันธุ์ EHA105 ที่มีพลาสมิด pCAPX คัดเลือกต้นที่ได้รับการถ่ายยีนบนอาหารที่เติมไฮโกรมัยซิน 10 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร พบว่าจากยอดที่ได้รับการถ่ายยีนทั้งหมด 750 ยอด มีต้นที่สามารถเจริญเติบโตได้บนอาหารคัดเลือก109 ต้น นำพืชทั้ง 109 ต้น มาตรวจสอบการเข้าแทรกของยีน ~iAPX~i ในจีโนม โดยใช้ไพรเมอร์ที่จำเพาะต่อยีน ~iAPX~i พบว่ามี 17 ต้นที่มียีน ~iAPX~i เข้าแทรกอยู่ในจีโนมนำพืชทั้ง 17 ต้นมาเพิ่มจำนวนต้นเพื่อทดสอบความทนเค็มที่ระดับความเข้มข้นของเกลือโซเดียมคลอไรด์ 0, 0.75, 1.0, 1.25 และ 1.5 เปอร์เซ็นต์พบว่าหญ้าเนเปียร์แคระที่ได้รับการถ่ายยีนสามารถเจริญเติบโตได้ที่ระดับ 1.5 เปอร์เซ็นต์ |
| บรรณานุกรม | : |
ปาริสัชชา แสงสุวรรณ . (2546). การโคลนยีน glutamine synthetase และการถ่ายยีน ascorbate peroxidase เข้าสู่หญ้าเนเปียร์แคระ (~iPennisetum purpureum~i cv. Mott).
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. ปาริสัชชา แสงสุวรรณ . 2546. "การโคลนยีน glutamine synthetase และการถ่ายยีน ascorbate peroxidase เข้าสู่หญ้าเนเปียร์แคระ (~iPennisetum purpureum~i cv. Mott)".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. ปาริสัชชา แสงสุวรรณ . "การโคลนยีน glutamine synthetase และการถ่ายยีน ascorbate peroxidase เข้าสู่หญ้าเนเปียร์แคระ (~iPennisetum purpureum~i cv. Mott)."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2546. Print. ปาริสัชชา แสงสุวรรณ . การโคลนยีน glutamine synthetase และการถ่ายยีน ascorbate peroxidase เข้าสู่หญ้าเนเปียร์แคระ (~iPennisetum purpureum~i cv. Mott). กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2546.
|
