| ชื่อเรื่อง | : | การทำเอนไซม์เอนโดกลูคาเนสจากเชื้อรา ~iPseudeurotium~i sp. HTN 14/1 ให้บริสุทธิ์และสมบัตรของเอนไซม์บริสุทธิ์ |
| นักวิจัย | : | อมรรัตน์ บุญมาศิริ |
| คำค้น | : | - |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2546 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=1162546001421 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | การแยกเอนไซม์เอนโดกลูคาเนสของเชื้อรา ~iPseudeurotium~i sp. HTN 14/1 ให้บริสุทธิ์ เพื่อศึกษาสมบัติของเอนไซม์นั้น ใช้ crude enzyme ที่มีค่า specific activity เท่ากับ 141.76 หน่วยต่อมิลลิกรัมโปรตีนที่สกัดจากเชื้อรา ซึ่งเพาะเลี้ยงแบบ solid state บนรำข้าวเจ้า ขั้นตอนแรกในการทำให้เอนไซม์บริสุทธิ์ คือการทำให้ crude enzyme เข้มข้นขึ้นด้วย vacuum evaporation ที่ 50 องศาเซลเซียส สามารถลดปริมาตร จาก5.16 ลิตร ลงได้เหลือ 315 มิลลิลิตร โดยยังคงได้เอนไซม์เหลืออยู่ 82 เปอร์เซ็นต์ แล้วแยกให้บริสุทธิ์ต่อไปด้วยคอลัมน์โครมาโตกราฟชนิด DEAE-Toyopearl, DEAE-Cellulose และ Toyopearl HW-55 gel filtrationตามลำดับ ได้เอนไซม์ที่บริสุทธิ์ขึ้น 89.13 เท่า มีค่า specific activity เป็น 12,636 หน่วยต่อมิลลิกรัมโปรตีน เมื่ศึกษาสมบัติต่างๆ ของเอนไซม์บริสุทธิ์ สรุปได้ว่าเอนไซม์บริสุทธิ์จากเชื้อรา ~iPseudeurotium~i sp.HTN 14/1 เป็นเอนไซม์ย่อยเซลลูโลสชนิดเอนโดกลูคาเนส ในกลุ่มที่ 5 ที่มีลำดับกรดอะมิโนที่ N-terminal เป็นAKVFQWFGSNE เอนไซม์บริสุทธิ์มีน้ำหนักโมเลกุลของ native protein เท่ากับ 88 กิโลดาลตัน และเป็นเอนไซม์ ที่ประกอบด้วยโปรตีน 2 subunit ที่มีน้ำหนักโมเลกุลใกล้เคียงกัน ขนาด 44 กิโลดาลตัน อุณหภูมิที่เหมาะสมที่สุดในการเกิดกิจกรรมของเอนไซม์บริสุทธิ์สูงมาก และเป็นที่ 3 รองจาก ~iRuminoccous marinus~iและ ~iAcidothermus cellulolyticus~i อุณหภูมิที่เหมาะสมในการเกิดกิจกรรมคือ 100 องศาเซลเซียส และ 85องศาเซลเซียส มีความคงตัวในช่วงอุณหภูมิ 20-55 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 นาที pH ที่เหมาะสมในการเกิดกิจกรรมของเอนไซม์บริสุทธิ์คือ 4.5 และมีความคงตัวในช่วง pH ที่กว้างคื 3.5 - 9.0 กิจกรรมเอนไซม์ที่ pH 2.5คงเหลือ 64 เปอร์เซ็นต์ สารประกอบ Mg('2+) และ Ca('2+) ความเข้มข้น 1 mM สามรถกระตุ้นให้กิจกรรมเอนไซม์เพิ่มขึ้น คิดเป็นกิจกรรมสัมพันทธ์ เท่ากับ 116.7 และ 109.5 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ แต่ EDTA ไม่มีผลต่อกิจกรรมเลย และ Hg('2+) ความเข้มข้น 1 mM และ Cu('2+) ความเข้มข้น 10 mM ทำให้เอนไซม์สูญเสียกิจกรรมทันที เอนไซม์ของ ~Pseudeurotium~i sp. HTN 14/1 สามารถย่อยสลาย carboxymethyl celluloseได้ดีที่สุด รองลงมาคือ (+,b)-glucan แต่จะย่อย crystalline ceullulose เช่น filter paper และ avicel ได้เพียงเล็กน้อย และไม่สามารถย่อย xylan, pectin และ pullulan ได้เลย ผลิตภัณฑ์ที่ได้จากกิจกรรมเอนไซม์ย่อย carboxymethylcellulose เป็นสารประเภท cello-oligosaccharide |
| บรรณานุกรม | : |
อมรรัตน์ บุญมาศิริ . (2546). การทำเอนไซม์เอนโดกลูคาเนสจากเชื้อรา ~iPseudeurotium~i sp. HTN 14/1 ให้บริสุทธิ์และสมบัตรของเอนไซม์บริสุทธิ์.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. อมรรัตน์ บุญมาศิริ . 2546. "การทำเอนไซม์เอนโดกลูคาเนสจากเชื้อรา ~iPseudeurotium~i sp. HTN 14/1 ให้บริสุทธิ์และสมบัตรของเอนไซม์บริสุทธิ์".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. อมรรัตน์ บุญมาศิริ . "การทำเอนไซม์เอนโดกลูคาเนสจากเชื้อรา ~iPseudeurotium~i sp. HTN 14/1 ให้บริสุทธิ์และสมบัตรของเอนไซม์บริสุทธิ์."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2546. Print. อมรรัตน์ บุญมาศิริ . การทำเอนไซม์เอนโดกลูคาเนสจากเชื้อรา ~iPseudeurotium~i sp. HTN 14/1 ให้บริสุทธิ์และสมบัตรของเอนไซม์บริสุทธิ์. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2546.
|
