| ชื่อเรื่อง | : | การเทียบมาตรฐาน PCR Diagnostics ที่พัฒนาขึ้นเพื่อการตรวจหา HIV-1 Proviral DNA in PBMCs |
| นักวิจัย | : | ประภาพรรณ เหล็กงาม |
| คำค้น | : | TWO STEP PCR , NESTED PCR , AGAROSE GEL ELECTROPHORESIS , REVERSE DOT BLOT HYBRIDIZATION |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2543 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=44766 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | วิทยานิพนธ์นี้ได้พยายามตรวจสอบเทคนิคพีซีอาร์ (PCR) ที่ใช้วิธีริเวิสดอดบรอด ไฮบริไดเซชั่น (reverse dot blot hybridization) และระบบพื้นฐานทางอิไลซา (ELISA) เพื่อการตรวจหาโปรไวรัสดีเอนเอของไวรัสเอดส์ซึ่งเป็นดีเอนเอที่ได้มาจากการ ทำให้โมโนนิวเคลียร์เซลล์แตกจากคนที่มีเชื้อ HIV-1 จำนวน 100 คน และคนที่ไม่มีเชื้อ HIV-1 จำนวน 60 คน ในการศึกษาครั้งนี้ดีเอนเอถูกสกัดมาจากโมโนนิวเคลียร์เซลล์โดยใช้วิธี M&W ซึ่งมี ประสิทธิภาพมาก สะดวก รวดเร็วและประหยัดค่าใช้จ่าย โมโนนิวเคลียร์เซลล์ถูกทำให้แตก โดยตรงในไลซีสบับเฟอร์ที่ประกอบด้วยกวานิดีนไอโซไธโอไซยาเนท (quanidineisothiocyanate) ภายใต้สภาวะเกลือเข้มข้น จากนั้นดีเอนเอทั้งหมดจะถูกจับด้วยอนุภาคของซิลิกอนไดออกไซ ซึ่งเปรียบเสมือนตัวค้ำจุนของแข็งดีเอนเอที่สกัดได้จะถูกเพิ่มขยายจำนวนด้วยเทคนิค พีซีอาร์ 2 ขั้นตอน ขั้นตอนแรกใช้ไพรเมอร์คู่นอก (outer primer) และขั้นตอนที่สองใช้ ไพรเมอร์คู่ใน (inner primer) ที่จำเพาะกับผลิตผลของพีซีอาร์รอบแรกและติดฉลากด้วย ไบโอตินที่ปลาย5(+,ข) เพื่อให้ได้ประสิทธิภาพสูงสุด องค์ประกอบต่าง ๆ ในปฏิกริยา ซึ่งประกอบด้วยอุณหภูมิและเวลาของขั้นตอนแอนเนียวลิ่ง (annealing temperature and time), ความเข้มข้นของ MgC1(,2), ปริมาณผลิตผลของวิธีพีซีอาร์รอบแรกที่ใช้เป็น แม่พิมพ์ในเทคนิคพีซีอาร์ขั้นตอนที่สอง, ปริมาณเอนไซม์แทคดีเอนเอโพลีเมอร์เรส (Tag DNA polymerase) และจำนวนรอบของวิธีพีซีอาร์ 2 ขั้นตอนจะถูกประเมินผลิตผลของพีซีอาร์ที่ถูก ติดฉลากด้วยไบโอติน ถูกวิเคราะห์เริ่มแรกโดยวิธีอกาโรสเจลอิเลกโตรโฟรีซีส (agarose gel electrophoresis) ย้อมด้วยสีเอดทิเดียมโบรไม (ethidium bromide) และถูกตรวจยืนยันด้วย วิธีริเวิสดอดบรอทไฮบริไดเซชั่น โดยใช้ตัวตรวจสอบ (probe) ที่ถูกตรึงไว้บนแผ่นเมมเบรน และตรวจหาสีที่เกิดขึ้นโดยอาศัย alkaline phosphatase conjugated streptavidin จากการวิเคราะห์สิ่งส่งตรวจจากผู้ติดเชื้อทั้งหมด 100 ราย พบว่าให้ผลบวกทั้ง 100 ราย แบ่งเป็นให้ผลบวก 89 ราย หลังจากการย้อมสีผลิตผลพีซีอาร์และอีก 11 รายที่ให้ผลลบหลังการ ย้อมสีแต่เมื่อถูกตรวจยืนยันด้วยวิธีริเวิสดอดบรอทไฮบริไดเซชั่นแล้วให้ผลบวก ในขณะที่ สิ่งส่งตรวจจากคนไม่ติดเชื้อ 60 ราย ให้ผลลบทั้ง 60 ราย จากข้อมูลแสดงให้เห็นว่าวิธี การตรวจหาเชื้อ HIV-1 โดยเทคนิคพีซีอาร์ (PCR) ที่ได้ออกแบบขึ้นมาใหม่ ซึ่งประกอบด้วย วิธีพีซีอาร์ 2 ขั้นตอน และการตรวจหาผลิตผลพีซีอาร์ที่ถูกติดฉลากด้วยไบโอตินโดยวิธี ริเวิสดอดบรอทไฮบริไดเซชั่น ซึ่งเป็นวิธีที่ปฏิบัติได้ มีความไวและมีความจำเพาะสำหรับ การตรวจหาโปรไวรัสดีเอนเอของไวรัสเอดส์ในสิ่งส่งตรวจ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเลือดของผู้ บริจาคซึ่งอยู่ในระยะเริ่มแรกของการติดเชื้อ เลือดของทารกที่คลอดจากมารดาที่ติดเชื้อ ไวรัสเอดส์และกลุ่มที่มีความเสี่ยงต่อการเป็นโรคภูมิคุ้มกันบกพร่อง |
| บรรณานุกรม | : |
ประภาพรรณ เหล็กงาม . (2543). การเทียบมาตรฐาน PCR Diagnostics ที่พัฒนาขึ้นเพื่อการตรวจหา HIV-1 Proviral DNA in PBMCs.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. ประภาพรรณ เหล็กงาม . 2543. "การเทียบมาตรฐาน PCR Diagnostics ที่พัฒนาขึ้นเพื่อการตรวจหา HIV-1 Proviral DNA in PBMCs".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. ประภาพรรณ เหล็กงาม . "การเทียบมาตรฐาน PCR Diagnostics ที่พัฒนาขึ้นเพื่อการตรวจหา HIV-1 Proviral DNA in PBMCs."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2543. Print. ประภาพรรณ เหล็กงาม . การเทียบมาตรฐาน PCR Diagnostics ที่พัฒนาขึ้นเพื่อการตรวจหา HIV-1 Proviral DNA in PBMCs. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2543.
|
