แมสปิน หรือ เซอร์ปิน บี5 จัดอยู่ในตระกูลของโปรตีนยับยั้งเซอรีนโปรติเอส แมสปินเป็นเซอร์ปินที่มีคุณสมบัติต้านมะเร็งเนื่องจากสามารถยับยั้งการเจริญ การลุกลามและแพร่กระจายของมะเร็งได้ทั้งในหลอดทดลองและในสัตว์ทดลอง แม้ว่ากลไกพื้นฐานการทำงานของแมสปินยังคงไม่ชัดเจน ทว่ามีการศึกษามากมายได้นำเสนอวิธีการทำงานของแมสปินซึ่งรวมถึงการยับยั้งฤทธิ์ของ 26เอส โปรติเอโซมภายในเซลล์มะเร็ง วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้เพื่อพิสูจน์ว่าบริเวณทำงาน (อาร์ ซี แอล) ของแมสปินรับผิดชอบต่อการยับยั้งฤทธิ์ของโปรติเอโซมหรือไม่ และค้นหาผลกระทบของการเกิดคอนจูเกชั่นระหว่างแมสปินและไอเอสจี15 ต่อระบบการเกิดคอนจูเกชั่นของยูบิควิติน การใส่ยีนเข้าไปในเซลล์มะเร็งเต้านมเพื่อทำให้มีการแสดงออกของแมสปิน, โอวัลบูมิน หรือ มิวแตนท์ ซึ่งเป็นลูกผสมระหว่างแมสปินกับโอวัลบูมินแล้ววิเคราะห์การทำงานของโปรติเอโซมโดยการวัดด้วยวิธีฟลูออเรสเซนส์และทำการตรวจสอบคอนจูเกตของยูบิควิติน-โปรตีนด้วยวิธีWestern blotting ผลการทดลองพบว่าการแสดงออกของแมสปินและมิวแตนท์ลดฤทธิ์ของโปรติเอโซมแต่เพิ่มการสะสมคอนจูเกตของยูบิควิติน-โปรตีนในเซลล์ ซึ่งบ่งบอกได้ว่าอาร์ซีแอลของแมสปินเป็นบริเวณที่เพียงพอแต่ไม่จำเป็นต่อการทำงานนี้ของแมสปิน นอกจากนี้ การเกิดคอนจูเกชั่นของแมสปินกับโปรตีนที่คล้ายยูบิควิตินที่ชื่อว่า ไอเอสจี15 เกิดขึ้นได้โดยการแสดงออกรีคอมบิแนนท์แมสปิน, ไอเอสจี15, ยูบีอี1แอล และ ยูบีซีเอช8 ในเซลล์มะเร็ง ซึ่งถูกวิเคราะห์โดยวิธี nickel pull-down assay และ immunoblotting ระบบไอเอสจี 15 คอนจูเกชั่นกระตุ้นการสะสมของยูบิควิติน-โปรตีนคอนจูเกตให้มีเพิ่มมากขึ้น ซึ่งเสนอแนะว่าการดัดแปลงแมสปินด้วยไอเอสจี15มีบทบาทสำคัญต่อหน้าที่ของแมสปินต่อระบบของยูบิควิติน-โปรติเอโซม ภายในเซลล์ คำหลัก: แมสปิน ไอเอสจี 15 ยูบิควิตินโปรติเอโซม คอนจูเกชั่น Maspin or SERPIN B5 belongs to the serine protease inhibitor superfamily of proteins. Maspin is a tumor suppressor SERPIN because it can inhibit growth, invasion and metastasis of cancer in vitro and in vivo. Although the underlying mechanism of maspin activity is still mystifying, several reports have proposed models of its actions including the inhibition of 26S proteasome activity of carcinoma cells. The aims of this study are to investigate whether the reactive center loop (RCL) of maspin is responsible for inhibiting the proteasome activity and determine an effect of maspin-ISG15 conjugation on cellular ubiquitin conjugating system. Using mammalian transfection system, 6xHis-FLAG-maspin, -ovalbumin or two maspin/ovalbumin chimeric mutants were expressed in mammary carcinoma cell line MDA-MB-231. The 20S proteasome activity was measured using a fluorometric assay, and the ubiquitin-protein conjugates detected by Western blotting. Expression of wild-type maspin and the mutants decreased the proteasome activity, but increased the accumulation of ubiquitin-protein conjugates indicating that the RCL of maspin is sufficient, but not necessary for its activity. Furthermore, conjugation of maspin by a ubiquitin-like protein, ISG15 was shown by co-expressing recombinant maspin, ISG15, UBE1L, and UbcH8 in the carcinoma cells and analyzed by a nickel pull-down assay and immunoblotting. The accumulation of ubiquitin-protein conjugates was further enhanced by ISG15 conjugation system suggesting that modification by ISG15 play a pivotal role on the function of maspin toward the cellular ubiquitin-proteasome system. Keywords: Maspin, ISG15, Ubiquitin, Proteasome, Conjugation