เพื่อให้การทดสอบฤทธิ์ของสมุนไพรต่อเชื้อบิดในไก่มีประสิทธิภาพ ไม่ สิ้นเปลืองค่าใช้จ่ายและไม่ต้องใช้ไก่เป็นจำนวนมากโดยไม่จำเป็น จึงได้ทำการพัฒนาต้นแบบ การทดสอบฤทธิ์ของสมุนไพรต่อเชื้อบิดในไก่โดยใช้เซลล์เพาะเลี้ยง เริ่มตั้งแต่การผลิต ?ocyst ให้ได้ปริมาณมากต้องทำการเลี้ยงไก่อายุ 1 วันด้วยอาหารที่ผสมยากันบิดไปจนถึงน้ำหนัก 500 กรัมแล้วหยุดยา 3 วัน จึงป้อนเชื้อบิดพบไก่ที่ขับเชื้อบิดถึง 80-90 เปอร์เซ็นต์และช่วงที่พบหาร ขับเชื้อจะแคบเข้าโดยพบในช่วงวันที่ 7 ถึง 10 หลังได้รับเชื้อ จากนั้นทำการเก็บ ?ocyst โดยขูด จากผนังไส้ตันย่อยเมือกด้วย pepsin และแยก ?ocysts ออกจากกากอาหาร ด้วย Clorox ? เย็น นำ ?ocysts ไปกระตุ้นให้เกิดการ sporulate โดยการแช่ใน 2 เปอร์เซ็นต์ (w/v) potassium dichromate (K2Cr2O4) นาน 48 ชั่วโมง แล้วทำให้เปลีอกของ sporulated ?ocysts แตกโดยการ กระแทกด้วย glass beads ขนาด 0.5 mm 10 ถึง 12 St จะได้ sporocysts ประมาณ 90 เปอร์เซ็นต์ จากนั้นทำการย่อยเปลือกหุ้ม sporocysts ด้วย Taurocholic 1 เปอร์เซ็นต์ (Sigma) ผสมกับ trypsin 0.25 เปอร์เซ็นต์ (Sigma) บ่มที่อุณหภูมิ 41 องศาเซลเซียสพบว่าระยะเวลาการ บ่มที่เหมาะสมอยู่ในช่วง 90 ถึง 120 นาที เพราะเป็นช่วงเวลาที่มีเปอร์เซ็นต์ของ sporozoites สูงที่สุด จากนั้นแยก sporozoites ออกจากเปลือก ด้วย column separation technique โดยทำ การบรรจุ nylon wool และ DEAE-cellulose (Sigma) ในกระบอกฉีดยาขนาด 3 มล. ใน PBSGbuffer pH 8.0 จะได้ sporozoites ซึ่งไม่มีเปลือก ?ocysts และ sporocysts เจือปน รวมทั้งมี ปริมาณเชื้อแบคทีเรียน้อยลงสามารถนำมาเติมในเซลล์เพาะเลี้ยงได้ จากผลการ infection เซลล์เพาะเลี้ยงด้วย sporozoites พบว่า sporozoites infection เซลล์ MDBK ไดดีที่สุด เหมาะสำหรับนำไปใช้ในแบบต้นแบบการทดสอบ สำหรับการแช่แข็ง sporozoites โดยใช้ DMSO เป็น cryoprotectant พบว่าสามารถ ป้องกันการแตกสลายของ sporozoites ได้เมื่อเทียบกับกลุ่มที่ไม่เติม cryoprotectant อย่างไรก็ ตามเมื่อนำ sproozoites เหล่านั้นมาทดสอบการ infection กับ MDBK เซลล์แล้วพบว่าการ infection ลดลงมากกว่า 90 เปอร์เซ็นต์ ดังนั้นวิธีการแช่แข็งดังกล่าวจึงไม่เหมาะสมสำหรับการ เก็บรักษา sporozoits เพื่อใช้ในการ infection เซลล์