สุกรในระบบฟาร์มที่มีการเลี้ยงหนาแน่นมักเกิดปัญหาการติดเชื้อ Mycoplasma hyopneumoniae ซึ่งก่อให้เกิดความเสียหายทางเศรษฐกิจ เนื่องจากสุกรเติบโตช้าและมีภาวะติดเชื้อแบคทีเรียซ้าซ้อน การตรวจการติดเชื้อที่รวดเร็วทาให้ควบคุมโรคและลดความสูญเสียลงได้ การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาเทคนิค multiplex PCR ในการตรวจหาดีเอ็นเอที่จาเพาะต่อเชื้อ Pasteurella multocida, Streptococcus suis, Haemophilus parasuis, Actinobacillus pleuropneumoniae และ Mycoplasma hyopneumoniae ได้พร้อมกันในหลอดเดียว และผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีน P46 glutathione-S transferase fusion (P46/GST fusion) และรีคอมบิแนนท์โปรตีน P36 glutathione-S transferase fusion (P36/GST fusion) ของเชื้อ M. hyopneumoniae โดยการตัดต่อยีน P46 และยีน P36 เข้าสู่ plasmid TOPO ในเชื้อ E. coli แล้วตัดต่อยีนนี้เข้าสู่ plasmid pGEX-6P-1 เพื่อผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีน P46/GST fusion และ P36/GST fusion ในเชื้อ E. coli ผลการศึกษาพบว่า เทคนิค multiplex PCR มีค่า limit of detection กับดีเอ็นเอของเชื้อแต่ละชนิดตั้งแต่ 10 picogram/?l และ limit of detection กับดีเอ็นเอของเชื้อเหล่านี้จากปอดสุกร มีค่า 106 CFU/g ในการผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีน P46/GST fusion พบว่ามีการสร้างอยู่ในส่วนของ inclusion body ส่งผลให้การแยกรีคอมบิแนนท์โปรตีน P46 พบการปนเปื้อนโปรตีนอื่นของเชื้อ E. coli จึงควรมีการแก้ไขก่อนนามาใช้เป็นแอนติเจนสาหรับตรวจการติดเชื้อ M. hyopneumoniae โดยวิธีอีไลซ่า ในขณะที่โปรตีน P36/GST fusion มีการสร้างอยู่ในส่วนของ inclusion body เช่นกัน เมื่อทาการแยกโปรตีนนามาฉีดกระตุ้นกระต่ายให้สร้างแอนติบอดีต่อโปรตีน P36/GST fusion เพื่อใช้เป็นแอนติบอดีจาเพาะในทาการทดสอบ กับเนื้อเยื่อปอดของสุกรที่ติดเชื้อ M. hyopneumoniae โดยวิธี immunoperoxidase นั้น จากการทดสอบไม่พบการเกิดสีที่จาเพาะบนเนื้อเยื่อปอดของสุกรที่ติดเชื้อ M. hyopneumoniae ทั้งนี้อาจเป็นไปได้ว่าแอนติซีรัมต่อ P36/GST ที่ผลิตจากกระต่ายไม่สามารถจับกับโปรตีนแอนติเจนหรือเชื้อ M. hyopneumoniae ที่อยู่บนเนื้อเยื่อปอดที่ตรึงฟอร์มาลินได้หรือจับได้น้อย การแก้ไขที่อาจเป็นไปได้ คือ เพิ่มการผลิต P36/GST จากการเพาะเลี้ยง E. coli โดยใช้อาหารเลี้ยงเชื้อปริมาณสูงขึ้น และปรับเปลี่ยนเทคนิคการสกัดโปรตีนบริสุทธิ์อาจส่งผลให้มีระดับแอนติบอดีต่อ P36 จากกระต่ายที่สูงมากขึ้นต่อการทาปฏิกิริยา immunoperoxidase ได้